高考生物微生物的培养与应用试题含2014试题

高考生物微生物的培养与应用试题含2014试题

‎2015届高考生物大一轮复习 微生物的培养与应用精品试题（含2014试题）‎ ‎1.（北京东城区2014届高三3月质量调研）下列有关生物学实验的叙述，正确的是（ 　   ）‎ A．利用平板划线法对土壤细菌进行计数 B．氨基酸与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应 C．诱导植物细胞染色体数目加倍必须使用一定浓度秋水仙素处理 D．制作腐乳时，加盐腌制可使豆腐块变硬且能抵制杂菌生长 ‎[解析] 1.平板划线法是分离菌种的方法，不能对细菌进行计数；双缩脲试剂可以检测蛋白质，与蛋白质产生紫色反应，但不能与氨基酸起作用；使用一定浓度的秋水仙素和低温诱导处理都可以使植物细胞的染色体数目加倍；制作腐乳时，加盐使豆腐中的水析出，从而使豆腐块变硬，同时可以抑制杂菌的生长。‎ ‎2.（北京西城区2014届高三上学期期末）研究人员把噬菌体和细菌按1︰10混合，然后除去游离的噬菌体，在培养过程中定期取样，稀释涂布在连片生长的细菌平面（菌苔）上，检测实验结果表明，混合后24min内取样涂布，菌苔上产生空斑的数目不变；混合24min后取样，菌苔上空斑数目迅速增加；再过10min取样，菌苔上空斑数稳定。下面的分析和推理不正确的是                                                        （    ）‎ A．24min内取样，新复制的噬菌体还未从细菌体内释放出来 B．34min时取样，根据空斑数量可推测样液中噬菌体的数量 C．取样液中的噬菌体涂布到菌苔上以后噬菌体不再增殖 D．实验证明病毒是一种生物，其具备在细胞内增殖的特性 ‎[解析] 2.把噬菌体和细菌按1︰10混合，稀释涂布在连片生长的细菌平面（菌苔）上，噬菌体会侵入细菌体内，导致细菌裂解，出现空斑；混合后24min内取样涂布，菌苔上产生空斑的数目不变，说明新复制的噬菌体还没有从细胞内释放出来；再过10min取样，菌苔上空斑数稳定，说明新复制的噬菌体已经完全释放出来，根据空斑数量以及实验前样液的混合比例可以推测出样液中噬菌体的数量；取样液中的噬菌体涂布到菌苔上，则噬菌体会侵入细菌，利用细菌的原料进行复制，产生大量新的噬菌体；该实验证明病毒是一种生物，具备在细胞内增殖的特性。‎ ‎3.（吉林市2014届高三上学期期末）苹果醋是指以苹果汁经发酵而成的苹果原醋，再兑以苹果汁等原料而成的饮品。下图是苹果醋的制作流程简图，请据图回答：     ‎ ‎                   ①       　　 ②‎ ‎ 鲜苹果汁→高纯度苹果酒→苹果原醋 + 苹果汁等原料→苹果醋 ‎（1）过程①用到的微生物是          ，若要检测是否产生了苹果酒可用          试剂进行检测。‎ ‎（2）②中使用到的微生物是            ，该微生物的代谢类型是              ， ‎ ‎（3）过程②中使用的微生物可以从食醋中分离纯化获得，方法是： ‎ 第一步：配置培养基。一般都含有水、无机盐以及碳源、_________‎ 第二步：对培养基用                          方法进行灭菌。 ‎ 第三步：接种：微生物常用的接种方法有平板划线法和              。 ‎ 第四步：培养：温度控制在30～35  ℃。 ‎ 第五步：挑选符合要求的菌落。‎ ‎（4） 在传统发酵技术中，果醋的制作往往在果酒制作基础上进行，反应简式：      。‎ ‎（5）在整个发酵过程中，溶液PH的变化趋势是         (升高、降低、先升后降、先降后升、基本不变) 。‎ ‎[解析] 3.（1）苹果汁经发酵成的苹果酒，应用酵母菌；检测酒精的方法是在酸性环境条件下，用重铬酸钾试剂进行检测，如果苹果酒由橙色变成灰绿色，说明有酒精产生。 （2）由苹果酒酿制成苹果原醋，需要使用到的微生物是醋酸菌，其代谢类型是异氧需氧型，条件是持续通氧，温度是30‎-35℃‎。‎ ‎（3）在微生物的分离纯化过程中，常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法等，因此要在培养基中加入琼脂制备固体培养基，并对培养基用高压蒸汽灭菌方法进行灭菌；醋酸菌适宜生存的温度为30～‎35℃‎。‎ ‎（4）醋酸菌好氧性细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸。表达式为：‎ C2H5OH→CH3COOH+H2O；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。‎ ‎（5）在整个发酵过程中，由于产生醋酸，使溶液的PH降低。‎ ‎4.（东莞市2014届高三上学期期末）下列有关生物学实验的叙述，正确的是（      ）‎ A．利用平板划线法对土壤细菌进行计数 B．氨基酸与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应 C．通常使用卡诺氏液来解离低温处理过的洋葱根尖细胞 D．使用低倍镜可观察到洋葱鳞片叶外表皮细胞的质壁分离 ‎[解析] 4.利用平板划线法对土壤细菌进行分离纯化，计数应用血球计数板；肽或蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应，氨基酸中无肽键与与双缩脲试剂不发生作用不发生反应；卡诺氏液起固定作用，解离时应用解离液：酒精和盐酸的混合液（1：1）；用低倍镜可以观察到质壁分离和复原过程，因为观察这个过程不需要看到细胞内部，只要看到细胞壁和细胞膜的相对移动就可以了。‎ ‎5. （江西红色六校2014级高三第二次联考）【生物——生物技术实践】( 第4小题1分，其他每空2分，共15分) ‎ 在生物技术实践过程中，往往需要注意某些实验步骤的操作，请将下列实验中的注意事项填写完整：‎ ‎⑴在腐乳的制作时，用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用          消毒；在血红蛋白的提取和分离中，若红细胞的洗涤次数过少，将无法除去          。‎ ‎⑵ 在提取植物细胞的DNA时，需要先用洗涤剂溶解         。在花药离体培养中剥离花药时，要彻底去除          ，因为与其相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。‎ ‎⑶在“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数” 课题中，往往需要稀释土壤溶液，为了避免杂菌污染，此过程每一步都要 在          旁操作。在固定化酵母细胞中加热溶解海藻酸钠时，最好采用          的方法。胡萝卜素提取的萃取过程应采用          加热，因为有机溶剂都是易燃物。‎ ‎⑷为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液和蒸馏水等在使用前必须进行           。‎ ‎[解析] 5.（1）在腐乳制作时，为防止杂菌污染，需要对玻璃瓶进行沸水消毒；洗涤红细胞的目的是除去杂蛋白，主要是血浆蛋白。‎ ‎（2）由于植物细胞有细胞壁，所以在提取植物细胞的DNA时，需要先用洗涤剂溶解细胞膜，动物细胞则用蒸馏水胀破；在花药离体培养中剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则接种后容易从受伤部位产生愈伤组织，同时还要测底去除花丝，因为与花丝相连的花药，不利于愈伤组织或胚状体的形成。‎ ‎（3）稀释土壤溶液的实验操作中，为了避免周围环境中微生物的污染，应在火焰旁操作，因为在火焰一定范围内，由于温度比较高，所以没有杂菌；在固定化酵母菌细胞中加热溶解海藻酸钠时，最好用小火间断加热的方法，如果加热太快，海藻酸钠会发生焦糊；胡箩卜素提取的萃取过程应避免明火加热，采用水浴加热，因为有机物都是易燃物，直接用明火加热容易引起燃烧、爆炸。‎ ‎（4）PCR是进行DNA的扩增，为避免外源DNA的污染，PCR实验中使用的相关器具如微量离心管、枪头、缓冲液和蒸馏水等应提前高压蒸汽灭菌。‎ ‎6. （南通2014届高三第一次调研）(8分)‎ ‎ 紫杉醇具有独特的抗肿瘤作用。研究人员从红豆杉中发现了一种具有产紫杉醇能力的内生真菌。为探究制备红豆杉内生真菌原生质体的适宜pH和温度，进行了如下实验：①培养菌株，离心收集菌丝体，并用渗透压稳定剂洗涤两次；②将获得的菌丝体，分别置于不同pH或温度的培养液中，并加入适量酶液，震荡、摇匀后，每隔一段时间，取样、过滤、离心，用渗透压稳定剂洗涤两次后，收集纯化的原生质体。③统计原生质体数量，结果如下。‎ 分析回答：‎ 酶解温度(℃) ‎ ‎  原生质体产量(╳106个／mL) ‎ ‎    25‎ ‎    12‎ ‎    28‎ ‎    22‎ ‎    32‎ ‎    31‎ ‎    35‎ ‎    26‎ ‎(1) 步骤②中，加酶液的目的是  ▲  ，洗涤时选用渗透压稳定剂的理由是  ▲ 。‎ ‎(2) 结果表明，制备红豆杉内生真菌原生质体的适宜条件是  ▲  、  ▲  、  ▲  。‎ ‎(3) 检验原生质体再生能力，需要配制再生固体培养基，培养基灭菌常采用　▲ 法，灭菌后需要冷却到  ▲ ℃左右才能用来倒平板。‎ ‎(4) 实验中将收集到的原生质体浓度为30╳106个／mL培养液先稀释l04倍，再各取0.1mL稀释液分别均匀涂布在3个再生固体培养基上培养。一段时间后，统计得到的菌落数分别为：27、21、24。则原生质体再生率(能再生的原生质体数占全部原生质体的比例) 约为  ▲  。‎ ‎[解析] 6.（1）原生质体是没有细胞壁的活细胞，真菌有细胞壁，加酶后破坏真菌的细胞壁，获得真菌的原生质体；由于真菌的细胞壁遭到破坏，所以洗涤时，渗透压稳定剂加入为防止原生质体被破坏。‎ ‎（2）由图可知，原生质体的产量最高：在PH值=5，酶解时间在4～5小，酶解温度为‎32℃‎。‎ ‎（3）对固体培养基进行灭菌最常用的方法是高压蒸汽灭菌；灭菌后需要冷却，需要将培养基冷却到不烫手，即大约在‎50℃‎作用时才能倒平板。‎ ‎（4）实验中将收集到的原生质体浓度为30╳106个／mL培养液先稀释l04倍，原生质体浓度为300个／mL，取0.1mL稀释液，得到30个。但实际测得是27、21、24。平均值是24。所以24÷30=0.8。即原生质体再生率为8%。‎ ‎7. （吉林实验中学2014级高三一模）【生物——选修1 生物技术实践】（15分）‎ 某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混合在一起，得到混合菌。请你完成分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌的实验步骤，并回答有关问题：‎ ‎（1）主要步骤：‎ ‎①制备两种培养基：一种是____________培养基，另一种加__________的培养基。分别分成两份，依次标上A，A’和B，B’，备用。‎ ‎②分别向A、B培养基中接种____________。‎ ‎③接种后，放在恒温箱中培养3～4天。‎ ‎④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A’、B’培养基中。‎ ‎⑤接种后，把A’、B’培养基放入恒温箱中培养3～4天。‎ ‎（2）回答问题：‎ 在步骤①中，为保证无杂菌污染，实验中应采用的主要措施有对培养基进行__________________、将____________在酒精灯火焰上灭菌、接种过程在__________________附近进行。第④⑤两个步骤的目的是获得___________________________。‎ ‎[解析] 7.⑴圆褐固氮菌能够自主固氮，酵母菌不能自主固氮，所以酵母菌不能在无氮的培养基上生活；而圆褐固氮菌是原核生物，酵母菌是真核生物，可利用青霉素能杀死原核生物，对真核细胞生长无影响，来分离圆褐固氮菌和酵母菌；然后通过培养获得较纯的圆褐固氮菌和酵母菌 ‎⑵实验中对培养基灭菌的最常用的方法是高压蒸汽灭菌；对接种工具如接种环，采用火焰灼烧灭菌；接种时要在酒精灯火焰附近进行操作，因为火焰附近温度高，没有杂菌污染；第④⑤两个步骤是对菌种进一步纯化。‎ ‎8. （黑龙江省哈三中2014届高三下学期第一次高考模拟考试理综试题）【生物一选修1：生物技术实践】（15分）‎ 酒精浓度过高会抑制酵母菌的生长繁殖，影响酒精产量。为此，研究人员将酒精耐受基因转入野生型酵母菌中，经筛选得到了耐高浓度酒精的酵母菌。过程如图甲所示，请据图回答下列问题：‎ ‎（1）通过筛选得到耐高浓度酒精酵母菌的技术是__________。②、③过程需要重复几次，目的是__________。某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是__________。‎ ‎（2）为证明分离纯化得到的酵母菌能提高酒精产量，可将等量的____________________和耐高浓度酒精的酵母菌分别接种于含等量葡萄糖的A、B两组发酵装置中，在__________℃条件下__________（填“密闭” 或“充气” ）培养。一段时间后取样，用__________检测，若实验结果为__________，则说明耐高浓度酒精的酵母菌能提高酒精产量。‎ ‎[解析] 8.（1）由图中过程，可以看出获得耐受高浓度酒精酵母菌的过程，通过导入酒精耐受基因，构建重组质粒，导入酵母菌，筛选，该过程属于基因工程；②、③过程为筛选、接种和接种到新的培养基，重复该过程，是为了进一步分离纯化获得耐酒精能力强的酵母菌；由图乙中的菌落分布特点为左边多，右边少，该同学的接种方法是稀释涂布平板法。‎ ‎（2）为证明分离纯化得到的酵母菌能提高酒精产量，需要有对照组，对照组选择野生型酵母菌；酵母菌生长的最适温度在‎20℃‎左右，所以将发酵装置放在18--‎-25℃‎条件下；酒精发酵须在无氧条件下进行，所以需要密闭培养；酸性重镉酸钾与酒精反应出现灰绿色，颜色越浓酒精越多。‎ ‎9. (河北省衡水中学2014届高三下学期二调考试理科综合试题) [生物——选修1：生物技术实践]（15分）‎ 胡萝卜素是一种常用的食用色素，可以预防白内障、有助于保护眼睛晶体的纤维部分，还可以促进眼内感光色素的生成，加强视力的形成；还可以预防夜盲症，加强眼睛变色的功能。可分别从胡萝卜或产胡萝卜素的微生物菌体中提取获得流程图如下，请根据其提取过程及胡萝卜素的性质，回答下列问题。‎ ‎  ‎ ‎（1）筛选产胡萝卜素的酵母菌菌R时，可选用_______或平板划线法接种。 （2）培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R的生长提供_____和________。 （3）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好     和______以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用______方式加热；萃取液浓缩前需进行__________。 （4）纸层析法可用于鉴定所提取胡萝卜素，鉴定过程中需用胡萝卜素        作为________。 （5）玫瑰精油的提取方法是           法，该方法_       __（填“适合” 或“不适合” ）胡萝卜素的提取；柠檬芳香油的制备通常用___       法。‎ ‎（6）工业上提取天然β-胡萝卜素的方法有三种即：                                  beitang ‎[解析] 9.⑴微生物培养常用的接种法有：稀释涂布平板法和平板划线法。‎ ‎⑵蔗糖可为酵母菌提供碳源，硝酸盐可为酵母菌提供氮源。‎ ‎⑶从胡萝卜中提取胡萝卜素时为防止胡萝卜素分解，干燥过程应控制好温度和时间；萃取过程中宜采用水浴方式加热；萃取液浓缩前需进行过滤，除去萃取液中的不溶物。‎ ‎⑷用纸层析法鉴定所提取胡萝卜素时，需用胡萝卜素标准样品做对照。‎ ‎⑸玫瑰精油化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶液，能随水蒸汽一同蒸馏，所以玫瑰精油的提取方法是水蒸汽蒸馏法；胡萝卜素化学性质稳定，不溶于水，溶于有机溶剂，但萃取胡萝卜素的有机溶剂需要有较高的沸点，所以水蒸汽蒸馏法不适合胡萝卜素的提取；柠檬芳香油的制备通常用压榨法。‎ ‎⑹工作上提取天然β-胡萝卜素的方法有三种：从植物中提取、从大面积种植的岩藻中获取、利用微生物的发酵生产。‎ ‎10. （天津市河东区2014年高三一模）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α－淀粉酶基因转入酵母菌中，经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图甲所示) 。（10分）‎ ‎（1）图甲中，过程①需要的酶有___________。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应加入________‎ ‎（2）α-淀粉酶基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间的原因是____________________________‎ ‎（3）除了用选择培养基筛选工程菌之外, 还可用DNA杂交技术直接鉴定带有重组质粒的酵母菌。具体操作如图乙所示，结合图乙回答一下问题 利用PCR技术制备DNA探针，需加入_________才能是DNA探针具有放射性。如何根据放射性自显影结果做出判断________________________________________________________________________________‎ ‎[解析] 10.（1）①步骤为将目的基因与运载体连接，需要先用同一种限制性核酸内切酶分别切割质粒和目的基因，露出相同的黏性末端，然后再用DNA连接酶连接为重组质粒；而在以淀粉为唯一碳源的培养基中，其他微生物难以利用淀粉而被抑制，从而筛选高效利用淀粉的工程酵母菌。‎ ‎（2）启动子的作用是使转录开始，而终止子的作用是使转录结束，所以要使目的基因成功的表达，必须位于重组质粒的启动子和终止子之间。‎ ‎（3）要使DNA探针具有放射性，必须对探针用放射性同位素进行标记；培养基上的菌落相当于复制到胶片上，将胶片上的菌落裂解，使DNA变成单链，与放射性同位素标记的探针结合，洗去未结合的探针，曝光后，会在相应菌落上出现放射性，根据根据光学胶片上放射自显影的具体斑点位置, 确定和挑选出克隆了目的基因的菌落。‎ ‎11. （山东潍坊2014届高三3月月考）莠去津是一种含氮农药，在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，可按下面程序选育能降解莠去津的细菌(目的菌) 。请据图回答：(已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明) ‎ ‎   (1) 由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的过程称为       ，目的是      。‎ ‎   (2) 在将C瓶菌种接种到固体培养基之前通常要进行        ，将菌种接种到固体培养基的方法有平板划线法和      法，从图中看本实验采用的是       (填“前者” 或“后者”) 。‎ ‎   (3) 一段时间后，培养基出现无透明带和有透明带两种菌落，我们筛选的目的菌是         菌落中的细菌，该茵落生长所需的氮元素主要来源于         。‎ ‎(4) 为弄清固体培养基中的非目的菌落来自C瓶菌种还是培养基，应如何设置对照组？‎ ‎　　　　　　    。‎ ‎[解析] 11.（1）从A瓶到C瓶液体培养液液中，不含氮，含有过量的莠去津，其目的是从中选择能适应该环境的细菌，并经扩大培养。‎ ‎（2）由于C瓶中细菌的浓度大，所以在接种到固体培养基之前，要按一定浓度进行稀释；将菌种接种到固体培养基的方法有：平板划线法和稀释涂布平板法；从C瓶中取出细菌后，进行了稀释，所以本实验采用的是稀释涂布平板。‎ ‎（3）有透明带说明，该细菌能分解莠去津，所以是我们筛选的目的菌；莠去津是一种含氮农药，所以该茵落生长所需的氮元素主要来源于莠去津。‎ ‎（4）配制的培养基，灭菌后不接种菌种，与实验组放在相同条件下培养，如果此时不能长出非目的菌，说明来自培养基；反之，则来自C瓶菌种。‎ ‎12.（成都市2014届高三第一次检测理综）（10分）苯酚(C6H5OH)是广泛存在于化工行业废水中的一种污染物。为了分离和纯化高效分解苯酚的细菌，科研人员进行了如图A所示的实验（实验中的LB培养基能使菌种成倍扩增）。请分析回答：‎ ‎（1）该实验中＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿等可放人干热灭菌箱中灭菌。与步骤②中培养基的成分相比，步骤③培养基成分的最大区别是以苯酚作为唯一的＿＿＿＿＿；步骤④中的培养基成为固体的原因是添加了＿＿＿＿＿。‎ ‎（2）若经步骤④培养后菌落的分布如图B，则接种时甲、乙、丙三个区域划线的操作顺序依次是＿＿＿＿＿＿＿。多次划线后，最终可得到由＿＿＿＿个细胞繁殖而来的单个菌落。‎ ‎（3）接种时，在第一区域划线后须将接种环＿＿＿＿＿＿＿后再划线，在第二次划线时须从第一次划线的末端开始，这样做的目的是＿＿＿＿＿＿＿。‎ ‎（4）步骤④的目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；经过步骤⑤培养后，应从残余苯酚浓度 ＿＿＿＿＿＿＿的培养瓶中再分离、培养目的菌株，若需将获得的菌种长期保存，常采用＿＿＿＿＿＿＿的方法。‎ ‎[解析] 12.（1）包括干热空气灭菌和火焰灼烧灭菌等以干热方法杀死细菌达到灭菌的目的；本法适用于干燥粉末、凡士林、油脂的灭菌，也适用于玻璃器皿(如试管、平皿、吸管、注射器) 和金属器具(如测定效价的钢管、针头、摄子、剪刀等) 的灭菌；细菌必须以现成的有机物为食物，所以苯酚作文唯一的碳源；琼脂在水中需加热至‎95℃‎时才开始熔化，熔化后的溶液温度需降到‎40℃‎时才开始凝固，所以它是配制固体培养基的最好凝固剂。‎ ‎（2）先用接种环挑取标本涂布于琼脂平板1区（占培养基总面积的1/4）并作数条划线，再于2、3、4区依次划线，每划完一个区域，均将接种环烧灼灭菌1次，冷后再划下一区域，每一区域的划线均与上一区域的划线交接1~3次，一个成功分区划线的平板，培养后分别观察1区形成菌苔，2区菌落连成线，3区和4区可分离到单个菌落。‎ ‎（3）先用接种环挑取标本涂布于琼脂平板1区（占培养基总面积的1/4）并作数条划线，再于2、3、4区依次划线，每划完一个区域，均将接种环烧灼灭菌1次，冷后再划下一区域，其目的是获取菌种。‎ ‎（4）步骤4用固体培养基，此培养基可供分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等用；液体培养基因营养物质分布均匀，与菌体表面接触充分，所以若要分离、培养目的菌株，应从残余苯酚浓度最低的培养瓶中分离；对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法，在3ml的甘油瓶中，装入1ml甘油后灭菌，将1ml培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混合后，放在－‎20℃‎的冷冻箱中保存。‎ 答案和解析 生物 ‎[答案] 1.D ‎[解析] 1.平板划线法是分离菌种的方法，不能对细菌进行计数；双缩脲试剂可以检测蛋白质，与蛋白质产生紫色反应，但不能与氨基酸起作用；使用一定浓度的秋水仙素和低温诱导处理都可以使植物细胞的染色体数目加倍；制作腐乳时，加盐使豆腐中的水析出，从而使豆腐块变硬，同时可以抑制杂菌的生长。‎ ‎[答案] 2.C ‎[解析] 2.把噬菌体和细菌按1︰10混合，稀释涂布在连片生长的细菌平面（菌苔）上，噬菌体会侵入细菌体内，导致细菌裂解，出现空斑；混合后24min内取样涂布，菌苔上产生空斑的数目不变，说明新复制的噬菌体还没有从细胞内释放出来；再过10min取样，菌苔上空斑数稳定，说明新复制的噬菌体已经完全释放出来，根据空斑数量以及实验前样液的混合比例可以推测出样液中噬菌体的数量；取样液中的噬菌体涂布到菌苔上，则噬菌体会侵入细菌，利用细菌的原料进行复制，产生大量新的噬菌体；该实验证明病毒是一种生物，具备在细胞内增殖的特性。‎ ‎[答案] 3.（15分, 除特殊说明外, 每空2分） ‎ ‎(1)   酵母菌 （1分）      重铬酸钾（1分） ‎ ‎(2) 醋酸菌  （1分）      异养需氧型   ‎ ‎（3）氮源      高压蒸汽            稀释涂布平板法     ‎ ‎（4）C2H5OH+O2→CH3COOH+H2O          （5）降低 ‎[解析]‎ ‎ 3.（1）苹果汁经发酵成的苹果酒，应用酵母菌；检测酒精的方法是在酸性环境条件下，用重铬酸钾试剂进行检测，如果苹果酒由橙色变成灰绿色，说明有酒精产生。 （2）由苹果酒酿制成苹果原醋，需要使用到的微生物是醋酸菌，其代谢类型是异氧需氧型，条件是持续通氧，温度是30‎-35℃‎。‎ ‎（3）在微生物的分离纯化过程中，常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法等，因此要在培养基中加入琼脂制备固体培养基，并对培养基用高压蒸汽灭菌方法进行灭菌；醋酸菌适宜生存的温度为30～‎35℃‎。‎ ‎（4）醋酸菌好氧性细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸。表达式为：‎ C2H5OH→CH3COOH+H2O；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。‎ ‎（5）在整个发酵过程中，由于产生醋酸，使溶液的PH降低。‎ ‎[答案] 4.D ‎[解析] 4.利用平板划线法对土壤细菌进行分离纯化，计数应用血球计数板；肽或蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应，氨基酸中无肽键与与双缩脲试剂不发生作用不发生反应；卡诺氏液起固定作用，解离时应用解离液：酒精和盐酸的混合液（1：1）；用低倍镜可以观察到质壁分离和复原过程，因为观察这个过程不需要看到细胞内部，只要看到细胞壁和细胞膜的相对移动就可以了。‎ ‎[答案] 5.(第4小题1分，其他每空2分，共15分)‎ ‎(1) 沸水　　 血浆蛋白 ‎(2) 细胞膜   花丝　　　　　　　　  ‎ ‎(3) 火焰　　  小火间断加热    水浴 ‎(4) 高压灭菌(1分)‎ ‎[解析] 5.（1）在腐乳制作时，为防止杂菌污染，需要对玻璃瓶进行沸水消毒；洗涤红细胞的目的是除去杂蛋白，主要是血浆蛋白。‎ ‎（2）由于植物细胞有细胞壁，所以在提取植物细胞的DNA时，需要先用洗涤剂溶解细胞膜，动物细胞则用蒸馏水胀破；在花药离体培养中剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则接种后容易从受伤部位产生愈伤组织，同时还要测底去除花丝，因为与花丝相连的花药，不利于愈伤组织或胚状体的形成。‎ ‎（3）稀释土壤溶液的实验操作中，为了避免周围环境中微生物的污染，应在火焰旁操作，因为在火焰一定范围内，由于温度比较高，所以没有杂菌；在固定化酵母菌细胞中加热溶解海藻酸钠时，最好用小火间断加热的方法，如果加热太快，海藻酸钠会发生焦糊；胡箩卜素提取的萃取过程应避免明火加热，采用水浴加热，因为有机物都是易燃物，直接用明火加热容易引起燃烧、爆炸。‎ ‎（4）PCR是进行DNA的扩增，为避免外源DNA的污染，PCR实验中使用的相关器具如微量离心管、枪头、缓冲液和蒸馏水等应提前高压蒸汽灭菌。‎ ‎[答案] 6.（8分，每空1分）‎ ‎（1）去除内生真菌的细胞壁   维持原生质体的正常形态，防止其破裂 ‎（2）温度为‎32℃‎   pH值为5   酶解时间4～5小时（或酶解时间4.5小时左右）‎ ‎（3）高压蒸汽灭菌   ‎‎50℃‎ ‎（4）8%‎ ‎[解析] 6.（1）原生质体是没有细胞壁的活细胞，真菌有细胞壁，加酶后破坏真菌的细胞壁，获得真菌的原生质体；由于真菌的细胞壁遭到破坏，所以洗涤时，渗透压稳定剂加入为防止原生质体被破坏。‎ ‎（2）由图可知，原生质体的产量最高：在PH值=5，酶解时间在4～5小，酶解温度为‎32℃‎。‎ ‎（3）对固体培养基进行灭菌最常用的方法是高压蒸汽灭菌；灭菌后需要冷却，需要将培养基冷却到不烫手，即大约在‎50℃‎作用时才能倒平板。‎ ‎（4）实验中将收集到的原生质体浓度为30╳106个／mL培养液先稀释l04倍，原生质体浓度为300个／mL，取0.1mL稀释液，得到30个。但实际测得是27、21、24。平均值是24。所以24÷30=0.8。即原生质体再生率为8%。‎ ‎[答案] 7.（15分）⑴无氮（2分）　　　青霉素（2分泌）　　　混合菌（2分）     ‎ ‎⑵高压蒸气灭菌（2分）　　　接种环（2分）　　酒精灯火焰（2分）　　　纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌（3分）‎ ‎[解析] 7.⑴圆褐固氮菌能够自主固氮，酵母菌不能自主固氮，所以酵母菌不能在无氮的培养基上生活；而圆褐固氮菌是原核生物，酵母菌是真核生物，可利用青霉素能杀死原核生物，对真核细胞生长无影响，来分离圆褐固氮菌和酵母菌；然后通过培养获得较纯的圆褐固氮菌和酵母菌 ‎⑵实验中对培养基灭菌的最常用的方法是高压蒸汽灭菌；对接种工具如接种环，采用火焰灼烧灭菌；接种时要在酒精灯火焰附近进行操作，因为火焰附近温度高，没有杂菌污染；第④⑤两个步骤是对菌种进一步纯化。‎ ‎[答案] 8.（15分）‎ ‎（1）基因工程（转基因或基因拼接计算）（1分）‎ 进一步分离纯化获得耐酒精能力强的酵母菌（2分）    稀释涂布平板（2分）‎ ‎（2）野生型酵母菌（2分）    18---25（2分）  密闭（2分）    重铬酸钾（2分）   B组的灰绿色比A组深（2分）‎ ‎[解析] 8.（1）由图中过程，可以看出获得耐受高浓度酒精酵母菌的过程，通过导入 酒精耐受基因，构建重组质粒，导入酵母菌，筛选，该过程属于基因工程；②、③过程为筛选、接种和接种到新的培养基，重复该过程，是为了进一步分离纯化获得耐酒精能力强的酵母菌；由图乙中的菌落分布特点为左边多，右边少，该同学的接种方法是稀释涂布平板法。‎ ‎（2）为证明分离纯化得到的酵母菌能提高酒精产量，需要有对照组，对照组选择野生型酵母菌；酵母菌生长的最适温度在‎20℃‎左右，所以将发酵装置放在18--‎-25℃‎条件下；酒精发酵须在无氧条件下进行，所以需要密闭培养；酸性重镉酸钾与酒精反应出现灰绿色，颜色越浓酒精越多。‎ ‎[答案] 9.（15分，每空1分）‎ ‎（1）稀释涂布平板法；（2）碳源  ；    氮源 ‎（3）时间、温度 ；    水浴  ；    过滤  （4）标准品    对照 ‎（5）水蒸气蒸馏   不适合    压榨      （6）植物   大面积种植岩藻  微生物发酵 ‎[解析] 9.⑴微生物培养常用的接种法有：稀释涂布平板法和平板划线法。‎ ‎⑵蔗糖可为酵母菌提供碳源，硝酸盐可为酵母菌提供氮源。‎ ‎⑶从胡萝卜中提取胡萝卜素时为防止胡萝卜素分解，干燥过程应控制好温度和时间；萃取过程中宜采用水浴方式加热；萃取液浓缩前需进行过滤，除去萃取液中的不溶物。‎ ‎⑷用纸层析法鉴定所提取胡萝卜素时，需用胡萝卜素标准样品做对照。‎ ‎⑸玫瑰精油化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶液，能随水蒸汽一同蒸馏，所以玫瑰精油的提取方法是水蒸汽蒸馏法；胡萝卜素化学性质稳定，不溶于水，溶于有机溶剂，但萃取胡萝卜素的有机溶剂需要有较高的沸点，所以水蒸汽蒸馏法不适合胡萝卜素的提取；柠檬芳香油的制备通常用压榨法。‎ ‎⑹工作上提取天然β-胡萝卜素的方法有三种：从植物中提取、从大面积种植的岩藻中获取、利用微生物的发酵生产。‎ ‎[答案] 10.（10分)‎ ‎（1）限制酶、DNA连接酶   淀粉 ‎（2) 使目的基因能够表达和发挥作用 ‎(3) 同位素 ‎ 根据光学胶片上放射自显影的具体斑点位置, 确定和挑选出克隆了目的基因的菌落 ‎[解析] 10.（1）①步骤为将目的基因与运载体连接，需要先用同一种限制性核酸内切酶分别切割质粒和目的基因，露出相同的黏性末端，然后再用DNA连接酶连接为重组质粒；而在以淀粉为唯一碳源的培养基中，其他微生物难以利用淀粉而被抑制，从而筛选高效利用淀粉的工程酵母菌。‎ ‎（2）启动子的作用是使转录开始，而终止子的作用是使转录结束，所以要使目的基因成功的表达，必须位于重组质粒的启动子和终止子之间。‎ ‎（3）要使DNA探针具有放射性，必须对探针用放射性同位素进行标记；培养基上的菌落相当于复制到胶片上，将胶片上的菌落裂解，使DNA变成单链，与放射性同位素标记的探针结合，洗去未结合的探针，曝光后，会在相应菌落上出现放射性，根据根据光学胶片上放射自显影的具体斑点位置, 确定和挑选出克隆了目的基因的菌落。‎ ‎[答案] 11.（12分）（除注明外，毎空1分）‎ ‎（1）选择培养   初步选择能降解莠去津的细菌（目的菌）并提高其密度（2分）‎ ‎（2）梯度稀释   稀释涂布平板    后者（2分）‎ ‎（3）有透明带   莠去津（2分）‎ ‎（4）配制的培养基，灭菌后不接种菌种，与实验组放在相同条件下培养（2分）‎ ‎[解析] 11.（1）从A瓶到C瓶液体培养液液中，不含氮，含有过量的莠去津，其目的是从中选择能适应该环境的细菌，并经扩大培养。‎ ‎（2）由于C瓶中细菌的浓度大，所以在接种到固体培养基之前，要按一定浓度进行稀释；将菌种接种到固体培养基的方法有：平板划线法和稀释涂布平板法；从C瓶中取出细菌后，进行了稀释，所以本实验采用的是稀释涂布平板。‎ ‎（3）有透明带说明，该细菌能分解莠去津，所以是我们筛选的目的菌；莠去津是一种含氮农药，所以该茵落生长所需的氮元素主要来源于莠去津。‎ ‎（4）配制的培养基，灭菌后不接种菌种，与实验组放在相同条件下培养，如果此时不能长出非目的菌，说明来自培养基；反之，则来自C瓶菌种。‎ ‎[答案] 12.（10分）‎ ‎[解析] 12.（1）包括干热空气灭菌和火焰灼烧灭菌等以干热方法杀死细菌达到灭菌的目的；本法适用于干燥粉末、凡士林、油脂的灭菌，也适用于玻璃器皿(如试管、平皿、吸管、注射器) 和金属器具(如测定效价的钢管、针头、摄子、剪刀等) 的灭菌；细菌必须以现成的有机物为食物，所以苯酚作文唯一的碳源；琼脂在水中需加热至‎95℃‎时才开始熔化，熔化后的溶液温度需降到‎40℃‎时才开始凝固，所以它是配制固体培养基的最好凝固剂。‎ ‎（2）先用接种环挑取标本涂布于琼脂平板1区（占培养基总面积的1/4）并作数条划线，再于2、3、4区依次划线，每划完一个区域，均将接种环烧灼灭菌1次，冷后再划下一区域，每一区域的划线均与上一区域的划线交接1~3次，一个成功分区划线的平板，培养后分别观察1区形成菌苔，2区菌落连成线，3区和4区可分离到单个菌落。‎ ‎（3）先用接种环挑取标本涂布于琼脂平板1区（占培养基总面积的1/4）并作数条划线，再于2、3、4区依次划线，每划完一个区域，均将接种环烧灼灭菌1次，冷后再划下一区域，其目的是获取菌种。‎ ‎（4）步骤4用固体培养基，此培养基可供分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等用；液体培养基因营养物质分布均匀，与菌体表面接触充分，所以若要分离、培养目的菌株，应从残余苯酚浓度最低的培养瓶中分离；对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法，在3ml的甘油瓶中，装入1ml甘油后灭菌，将1ml培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混合后，放在－‎20℃‎的冷冻箱中保存。‎