【生物】2019届一轮复习苏教版微生物的分离和培养教案

【生物】2019届一轮复习苏教版微生物的分离和培养教案

第1课时　微生物的分离和培养 ‎[学习导航]　1.简述高压蒸汽灭菌锅的使用方法及注意事项。2.掌握制备细菌培养基的方法。3.学会利用无菌操作技术接种与培养大肠杆菌。‎ ‎[重难点击]　1.培养基的配制方法及常见种类。2.大肠杆菌的接种与分离培养。‎ 一、微生物分离和培养的基本理论 ‎1.无菌操作技术 实验室常利用高温处理达到灭菌效果，包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。‎ ‎(1)干热灭菌方法是将拟灭菌的物品放在干热灭菌箱内，在160～170 ℃温度下加热1～2 h以达到灭菌的目的。‎ ‎(2)湿热灭菌方法常采用高压蒸汽灭菌锅进行，如手提式高压蒸汽灭菌锅就是实验室常用的灭菌仪器之一。高压蒸汽灭菌锅的使用包括加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等步骤。‎ ‎2.配制培养基 ‎(1)培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。‎ ‎(2)培养基类型 ‎①天然培养基：采用动植物组织或微生物细胞以及它们的提取物或粗消化物配制而成，如牛肉膏蛋白胨培养基。‎ 优点：取材便利、营养丰富、配制简便；‎ 缺点：营养成分难以控制、实验结果的重复性较差。‎ ‎②合成培养基：由准确称量的分析纯等级别的高纯度化学试剂加蒸馏水配制而成，如葡萄糖铵盐培养基。‎ 优点：化学成分及其含量明确、实验的可重复性好；‎ 缺点：配制繁琐、成本较高。‎ ‎(3)培养基成分：一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐等最基本的物质。‎ ‎(4)培养基的配制原则：在配制培养基时，根据拟培养的微生物的不同需要，有时还要加入维生素等特殊的营养物质，并要调节培养基的pH使之满足微生物生长的需要。‎ ‎3.接种微生物 ‎(1)接种的概念：在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。‎ ‎(2)常用的接种工具：玻璃涂布器、接种针、接种环等。‎ ‎(3)接种方法 ‎①用接种针进行穿刺接种。‎ ‎②用接种环进行斜面接种或在固体培养基平板上进行划线接种。‎ ‎③用玻璃涂布器进行涂布平板接种等。‎ ‎1.“无菌操作”与人们的生活休戚相关，无时无处不在。在日常生活、生产实践、自身健康防护中，有哪些“无菌操作”的例子？‎ 答案　日常生活、生产实践、自身健康防护中“无菌操作”的例子分别有：(1)被褥、鞋袜要常晒；肉制品储存时用盐腌等。(2)家畜阉割后，要在其伤口处涂抹一些酒精或白酒；初冬杨树树干涂刷生石灰水等。(3)打针时，注射部位要用酒精棉球擦洗，一般要在其伤口处涂抹一些碘酒。‎ ‎2.实验室常利用高温处理达到灭菌效果，包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。以下图高压蒸汽灭菌锅的使用为例，探究无菌技术的方法。‎ ‎(1)高压蒸汽灭菌的使用原理是什么？‎ 答案　使用原理：将待灭菌物品放在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内；把锅内的水加热煮沸，并把其中原有的冷空气彻底驱尽后将锅密闭；再继续加热就会使锅内的蒸汽压逐渐上升，从而温度也随之上升到100 ℃以上。‎ ‎(2)简述手提式高压蒸汽灭菌锅的使用步骤。‎ 答案　加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等。‎ ‎(3)消毒和灭菌的原理是什么？消毒和灭菌都能杀死所有的微生物吗？是否适用于所有的生物和物品？‎ 答案　①都是使微生物的蛋白质变性，借此杀死微生物。‎ ‎②灭菌可杀死处理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子)，而消毒仅能杀死物体表面或内部的部分微生物(一般不包括芽孢和孢子)。③不是，无菌技术既要考虑效果，又要考虑操作对象的承受能力。例如，活体生物材料、操作者的双手等只能消毒，而不能灭菌。‎ ‎(4)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？‎ 答案　还能有效避免污染环境以及操作者自身被微生物感染。‎ ‎3.微生物的培养离不开培养基，根据下面某微生物培养基的配方回答下列问题：‎ 成分 含量 NaNO3‎ ‎3 g K2HPO4‎ ‎1 g KCl ‎0.5 g MgSO4·7H2O ‎0.5 g FeSO4‎ ‎0.01 g C6H12O6‎ ‎30 g H2O ‎1 000 mL 青霉素 ‎0.1万单位 ‎(1)该培养基的碳源、氮源分别是什么？‎ 答案　碳源：C6H12O6；氮源：NaNO3。‎ ‎(2)依据物理性质用途划分，该培养基属于什么培养基？‎ 答案　依据物理性质划分，该培养基属于液体培养基；依据用途划分，则属于选择培养基。‎ 根据培养基的原料，所培养微生物的同化作用的类型是异养型，培养的微生物可能是酵母菌或霉菌。‎ ‎(3)在固体培养基中加入的琼脂能为微生物提供营养吗？为什么？‎ 答案　不能，微生物不能分解琼脂。‎ ‎(4)普通培养基能培养病毒吗？为什么？‎ 答案　不能，因为病毒只能进行活细胞寄生生活。‎ 整合提升　(1)消毒与灭菌的区别 项目 条件 结果 常用的方法 消毒 较为温和的物理学或化学方法 仅杀死物体上绝大多数微生物(‎ 煮沸消费法(在100 ℃下5～‎ 包括病原微生物和有害微生物的营养细胞)‎ ‎6 min可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢)、巴氏消毒法、化学药剂消毒法 灭菌 强烈的物理学或化学方法 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌 ‎(2)培养基的成分及功能 营养要素 含义 作用 主要来源 碳源 凡能提供所需碳元素的物质 构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质 无机碳源：CO2、NaHCO3等；‎ 有机碳源：糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油等 氮源 凡能提供所需氮元素的物质 合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物 无机氮源：NH3、铵盐、硝酸盐等；‎ 有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 生长因子(特殊营养物质)‎ 生长必不可少的微量有机物 酶和核酸的组成成分 维生素、氨基酸、碱基等 水 在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高 不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定 培养基、大气、代谢产物等 无机盐 为微生物提供除碳、氮元素以外的各种重要元素，包括某些大量元素 细胞内的组成成分；生理调节物质；某些化能自养菌的能源；酶的激活剂 培养基、大气等环境 ‎1.高温灭菌的原理是(　　)‎ A.每种微生物生长的最适温度是一定的 B.微生物对于高温环境不适应 C.高温破坏了微生物细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动 D.高温降低了环境中氧的浓度 答案　C 解析　高温的致死作用主要是使微生物的蛋白质和核酸等重要生物大分子物质发生不可逆转的变性。‎ ‎2.下列关于培养基的说法正确的是(　　)‎ A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B.培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C.除水以外的无机物只能提供无机盐 D.无机氮源不可能提供能量 答案　A 解析　根据培养基的物理性质，可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基，在液体培养基中加入不同量的凝固剂如琼脂可形成半固体或固体培养基；除水以外的无机物如NH4HCO3，既可以是碳源，也可以是氮源，不仅仅提供无机盐；无机氮源有时也能提供能量，如NH3可以为硝化细菌提供能量。‎ 方法链接　培养基的种类 分类标准 培养基种类 培养基特点 作用 物理性质 固体培养基 外观固态 微生物的分离、计数等 半固体培养基 容器放倒不致流出，剧烈振动则破散 观察微生物的运动、鉴定菌种等 液体培养基 呈液态 常用于工业生产 功能 选择培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长 选择、分离 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品 鉴定 成分来源 天然培养基 化学成分还不清楚 工业上大规模的微生物发酵生产 合成培养基 化学成分完全了解 在实验室用来对微生物分析 二、大肠杆菌的接种与分离培养 ‎1.配制牛肉膏蛋白胨培养基 →→→→→ ‎2.斜面接种和培养大肠杆菌 斜面接种大肠杆菌的主要目的有菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。具体操作步骤：‎ →→→→→→ ‎3.平板划线分离和培养大肠杆菌 在实验室中，平板常常被用来培养、分离细菌等微生物。‎ ‎(1)牛肉膏蛋白胨固体培养基的平板制作 配制好的培养基装瓶灭菌→倒平板操作(A.打开瓶塞→B.灼烧瓶口灭菌→C.倒培养基→D.倒置平板)。‎ ‎(2)平板划线分离与培养大肠杆菌 ‎①平板划线法的含义：用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。‎ ‎②注意事项：接种和划线操作时需要在酒精灯火焰附近进行。‎ ‎1.利用培养基培养微生物时，首先要把微生物接种到培养基上。以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例，完成下列有关问题：‎ ‎(1)以下为细菌培养基的配制的流程，若将分装步骤与调节pH步骤颠倒过来是否可行？‎ →→→→ ‎→ 答案　不行。若分装后再调节pH，会使培养基中pH调节不均匀；还可能将培养基弄到试管口，易被污染。‎ ‎(2)从防止杂菌污染的角度思考，平板冷凝后将平板倒置的原因是什么？‎ 答案　平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。‎ ‎2.斜面接种和培养大肠杆菌 ‎(1)下图接种方法分别是什么？‎ 答案　图1是穿刺接种、图2是斜面接种、图3是平板划线接种。‎ ‎(2)下表是关于接种操作步骤及其目的或分析说明，请完善下表。‎ 顺序 接种操作步骤 分析说明或目的 ‎①‎ 将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红 将接种环灭菌，避免污染菌种 ‎②‎ 在火焰旁冷却接种环，拔去试管棉塞 避免杂菌污染菌种 ‎③‎ 将试管口通过火焰 灼烧灭菌，防止试管口菌体污染培养基 ‎④‎ 将灭过菌的接种环伸入菌种管，先将环部接触斜面顶端 使接种环冷却，避免杀死菌种 ‎⑤‎ 抽出接种环时，带菌部分不要触及管壁或通过火焰 防止菌种沾于管壁，防止菌种被杀死 ‎⑥‎ 在培养基斜面上由底部向上轻轻划“S”型曲线，但不要将培养基表面划破 初步接种。划破培养基不利于后续的继续划线，长出的菌落不标准 ‎⑦‎ 将试管口与试管塞通过火焰2～3次，迅速塞紧试管 防止杂菌污染 ‎⑧‎ 将接过种的试管，放在恒温箱(37 ℃)中培养24_h 培养细菌，观察接种和培养的结果 ‎3.平板划线分离和培养大肠杆菌 在实验室中，平板常常被用来培养、分离细菌等微生物。思考回答下列相关问题：‎ ‎(1)平板划线法接种菌种时，哪些操作可防止杂菌污染？‎ 答案　①接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧。②划完一个区域后，将接种环灼烧，冷却后再划下一区域。③接种环沾取菌液时，要将试管口、棉塞等通过火焰。④划线时将培养皿打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内。‎ ‎(2)在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？‎ 答案　避免接种环温度太高，杀死菌种。‎ ‎(3)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？‎ 答案　操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，是为了保证菌落是由单一的细菌繁殖而成。‎ ‎(4)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？‎ 答案　需要。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。‎ ‎(5)在做第二次划线以及其后的操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？‎ 答案　划线后末端含有的细菌数目较少，每次从上一次的末端开始划线能够使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终分散成单个的细菌。‎ ‎(6)为何最后一次划线不能与第一次划线相连？‎ 答案　最后一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次划线相连则增加了细菌的数目，达不到纯化的效果。‎ ‎3.关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，不正确的是(　　)‎ A.配制固体培养基时一般要加适量的琼脂 B.分装到试管中的液体培养基的高度约为试管高度的1/2‎ C.待培养基冷却至50 ℃左右时进行搁置斜面 D.搁置斜面时，斜面长度不超过试管总长的1/2‎ 答案　B 解析　在配制固体培养基时，琼脂是最常用的凝固剂，A正确；分装到试管中的液体培养基的高度约为试管长度的1/5，B错误；待培养基冷却至50 ℃左右时进行搁置斜面，以防培养基因温度过高而烫手，也不能过低，防止凝固后不易倒平板，C正确；搁置斜面时，将试管口部枕在高约1 cm的木条或其他合适高度的物体上，使其自然倾斜，斜面长度不超过试管总长的1/2，D正确。‎ ‎4.在接种操作的过程中，不正确的是(　　)‎ A.要将接种环灼烧灭菌 B.取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌 C.将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位 D.接种后还要将管口灭菌加塞 答案　C 解析　接种环伸入试管内后先接触培养基斜面顶端或其他无菌体的培养基部位，待接种环冷却后再接触长菌部位。‎ ‎5.下图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是(　　)‎ A.操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌 B.划线操作须在火焰上进行 C.在5区域中才可以得到所需菌落 D.在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌 答案　D 解析　在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作在火焰边进行；在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。‎ 一题多变 ‎(1)平板划线法所用培养基属于什么培养基？‎ 答案　琼脂固体培养基。‎ ‎(2)如何确认制备的培养基是否合格？‎ 答案　将一个未接种的培养基同接种培养基一起培养，若未接种的培养基无菌落生长，说明制备的培养基合格，否则需要重新制备。‎ ‎(3)如果培养基上长出的菌落相互重叠，则说明存在什么问题？‎ 答案　说明划线不充分，应该重新操作。‎ ‎(4)在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于哪里？‎ 答案　接种环上的菌种直接来源于上次(第一区中)划线的末端。‎ ‎1.下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，其中甲、乙、丙依次指(　　)‎ A.安全阀、排气阀、压力表 B.排气阀、安全阀、压力表 C.安全阀、排气阀、温度表 D.排气阀、安全阀、温度表 答案　A 解析　根据教材P8图Ⅰ－Ⅰ高压蒸汽灭菌锅结构示意图，可判断甲、乙、丙分别为安全阀、排气阀、压力表。‎ ‎2.在培养基的配制过程中，具有如下步骤，其正确的顺序为(　　)‎ ‎①溶化　②调pH　③加棉塞　④包扎　⑤分装　⑥称量 A.①②⑥⑤③④ B.⑥①②⑤③④‎ C.⑥①②⑤④③ D.①②⑤④⑥③‎ 答案　B 解析　上述步骤中，培养基的配制顺序为称量→溶化→调pH→分装→加棉塞→包扎。‎ ‎3.下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是(　　)‎ A.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 B.每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种 C.在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 D.划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 答案　C 解析　平板划线操作中，接种环挑取菌种前灼烧的目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种。划线结束仍需灼烧接种环，是为了能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。‎ ‎4.下列依次表示倒平板、接种的位置，以及划线法接种的路径示意图，其中错误的是(　　)‎ 答案　D 解析　倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，防止空气中的杂菌污染，故A正确；接种时，左手将培养皿打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，故B正确；划线时要从上一次划线的末端开始进行，让菌种来源于上一次划线末端，故C正确，D错误。‎ ‎5.下表所示为某微生物培养基的配方，请回答下列问题：‎ 成分 含量 NaNO3‎ ‎3 g K2HPO4‎ ‎1 g KCl ‎0.5 g MgSO4·7H2O ‎0.5 g FeSO4‎ ‎0.01 g C6H12O6‎ ‎30 g H2O ‎1 000 mL 青霉素 ‎0.1万单位 ‎(1)按照物理性质，该培养基属于____________________培养基。‎ ‎(2)该培养基中的碳源是______________________。不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行的是调整pH和__________________________，倒平板时，一般需冷却至______________左右，在__________________附近操作。‎ 答案　(1)液体　(2)C6H12O6　灭菌　50 ℃　酒精灯火焰 解析　(1)培养基中没有加入琼脂，是液体培养基。‎ ‎(2)C6H12O6为微生物提供碳源，培养基在分装前要调整pH和灭菌，倒平板时，一般需冷却至50 ℃左右，在酒精灯火焰附近操作。‎ 课时作业 ‎[学考达标]‎ ‎1.在微生物的实验室培养中，下列各项操作不需要在无菌条件下进行的是(　　)‎ A.配制培养基 B.倒平板 C.接种 D.培养 答案　A 解析　配制培养基时不需要无菌操作，因为配制后的培养基需要进行高压蒸汽灭菌。‎ ‎2.下列关于灭菌和消毒的叙述中，不正确的是(　　)‎ A.灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B.消毒和灭菌实质上是相同的 C.接种环用灼烧法灭菌 D.常用的灭菌方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法 答案　B 解析　消毒是指用较为温和的物理学或化学方法杀灭物体上绝大多数微生物的方法，而灭菌则是指采用强烈的物理学或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失生长和繁殖能力的方法，二者实质上不同。‎ ‎3.将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 ℃恒温箱的目的是(　　)‎ A.对比观察培养基有没有被微生物利用 B.对比分析培养基上是否生有杂菌 C.没必要放入未接种的培养基 D.为下次接种时再使用 答案　B 解析　通过设计对照实验，目的是为了检测培养基制备是否成功，即是否生有杂菌。‎ ‎4.下列有关倒平板操作错误的是(　　)‎ A.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B.使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C.将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上 D.等待平板冷却凝固后需要倒过来放置 答案　C 解析　倒平板时，培养皿的盖不能完全打开。‎ ‎5.在微生物的实验室培养过程中，获得纯净培养物的关键是(　　)‎ A.将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 B.接种纯种细菌 C.在适宜条件下培养 D.防止外来杂菌的入侵 答案　D 解析　将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌只是无菌技术的一个方面，不代表无菌技术的全部，A错误；接种纯种细菌是获得纯净培养物的前提，B错误；接种方法和培养条件不能防止杂菌的污染，C错误；防止外来杂菌的入侵是获得纯净培养物的关键，D正确。‎ ‎6.在平板划线操作中，错误的是(　　)‎ A.将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红 B.将烧红的接种环在火焰旁边冷却 C.接种环在平板上的划线位置是随机的 D.在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰 答案　C 解析　接种环灼烧及接种前后试管口要通过火焰，其目的是为了防止杂菌污染，将接种环先冷却再接种可以避免高温烫死菌种，因此A、B、D都是正确的；在平板上划线时，要划三至五条平行线，而不是随机划线，因此C项错误。‎ ‎[高考提能]‎ ‎7.防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是(　　)‎ A.实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒 B.接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌 C.在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染 D.使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境 答案　B 解析　为防止杂菌污染，研究和应用微生物时应进行消毒和灭菌，实验室可以用紫外线或化学药物进行消毒，A项正确；接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层即外焰部位灼烧灭菌，B项错误；在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染，C项正确；使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，D项正确。‎ ‎8.下列关于平板划线操作正确的是(　　)‎ A.使用已灭菌的接种针、培养皿，在操作过程中不再灭菌 B.打开含菌种的试管，需通过火焰灭菌，取出菌种后，需马上塞上棉塞 C.将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可 D.最后将平板倒置，放在培养箱中 答案　D 解析　在平板划线时，已灭过菌的接种针在每次划线后，都必须用灼烧灭菌法灭菌，以防杂菌污染，A错误；盛有菌种的试管在打开或重新塞棉塞前，都需通过火焰灼烧灭菌，B 错误；接种时用带有微生物的接种环在平板培养基表面分区划线，不能将沾有菌种的接种环伸入平板内，C错误；平板凝固后，须将平板倒置，D正确。‎ ‎9.下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是(　　)‎ A.①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行 B.步骤①中，待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖 C.步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灼烧处理 D.划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养 答案　B 解析　培养与纯化大肠杆菌的过程中需要在酒精灯的火焰旁进行，故A正确；步骤①中倒入培养基后立即盖上培养皿的皿盖，故B错误；步骤③接种时，每次划线前后都要对接种环进行灼烧处理，故C正确；划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱培养，防止冷凝水污染培养基，故D正确。‎ ‎10.接种是微生物培养和微生物选择的必要步骤之一。下列关于接种的叙述中，不正确的是(　　)‎ A.接种通常在酒精灯火焰附近进行 B.接种之前要对接种环进行灼烧灭菌 C.接种指无菌条件下将微生物接入培养基的操作 D.接种时接种环要将培养基的表面划破 答案　D 解析　为了保证无菌操作，整个接种过程都需要在酒精灯火焰旁进行，故A、B、C均正确；接种时接种环不能划破培养基的表面，故D错误。‎ ‎11.下表是某种微生物培养基的配方表，请据表回答下面的问题：‎ 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 蒸馏水 ‎0.5 g ‎1 g ‎0.5 g ‎1 g ‎200 mL ‎(1)此培养基的营养成分有五类，其中蛋白胨提供的营养物质是____________________。‎ ‎(2)在培养基制备过程中，各种成分溶化后分装前，必须的操作是____________。‎ ‎(3)在农业生产研究上，常需要进行微生物的培养和计数。如图是利用____________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步____________分散到培养基的表面。为达到这一目的，操作上应注意：________________________________________________ (至少答两项)。‎ 答案　(1)碳源、氮源、维生素 ‎(2)调节pH ‎(3)平板划线　稀释　①每次划线前要灼烧接种环；②冷却后从上一区划线末端开始划；③首尾区不重叠(任选两项)‎ 解析　微生物培养基含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质，培养基制备过程中各种成分溶化后分装前，必须调节pH。‎ ‎12.下图显示微生物的接种实验中的一些步骤，回答下列问题：‎ ‎(1)图中接种工具的名称是____________。‎ ‎(2)解释步骤①和②的操作：‎ 步骤①中，为何要将接种工具灼烧至变红？____________________________________。‎ 步骤②中，为何要将接种工具冷却？__________________________________________。‎ ‎(3)图示接种方法的目的是___________________________________________________。‎ 答案　(1)接种环 ‎(2)杀灭接种环上可能引起污染的微生物　避免烫死接种物 ‎(3)使接种物逐渐稀释，经培养后获得单个菌落 解析　(1)图中所用的接种工具是接种环。(2)步骤①中，将接种工具灼烧至变红的目的是杀灭接种环上可能引起污染的微生物；步骤②中，将接种工具冷却的目的是避免烫死接种物。(3)图示接种方法是平板划线法，目的是使接种物逐渐稀释，经培养后获得单个菌落。‎ ‎13.请回答下列关于大肠杆菌培养的问题：‎ ‎(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑________、____________和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、___________________、‎ ‎__________________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。‎ ‎(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________(消毒、‎ 灭菌)；操作者的双手需要进行清洗和________(消毒、灭菌)；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_________________________。‎ ‎(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是________________________________________________________________________。‎ ‎(4)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。‎ 答案　(1)温度　酸碱度　易培养　生活周期短 ‎(2)灭菌　消毒　损伤DNA的结构 ‎(3)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生 ‎(4)灭菌 ‎[真题体验]‎ ‎14.(2015·江苏，19)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是(　　)‎ A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖 B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 D.用记号笔标记培养皿中的菌落时，应标记在皿底 答案　D 解析　高压灭菌加热结束时，应切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的指针指向0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品，A错误；倒平板时应将培养皿打开一条稍大的缝隙再缓慢倒入培养基，B错误；高温的接种环会杀死细菌，应等接种环冷却后再挑取菌落，C错误；培养皿一般倒置放在培养箱中，且用记号笔标记在皿底便于取出时分类，D正确。‎ ‎15.(2014·江苏，30改编)为了获得β胡萝卜素产品，某小组开展了产β胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：‎ ‎(1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是______________________________；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该________________________。‎ ‎(2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是______________________________。‎ ‎(3)为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是___________________________________________。‎ ‎(4)为增加β胡萝卜素提取量，在研磨酵母细胞时，添加石英砂的目的是________________；研磨时__________(填“需要”或“不需要”)添加CaCO3，理由是___________________。‎ 答案　(1)干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)　用牛皮纸(报纸)包扎器皿 ‎(2)抑制细菌(放线菌)生长 ‎(3)接种环温度过高，菌被杀死 ‎(4)有助于研磨充分　不需要　β胡萝卜素较耐酸 解析　(1)培养皿灭菌常用的方法有湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)、干热灭菌等。将培养皿放入灭菌锅之前通常用牛皮纸或报纸包扎，避免灭菌后的再次污染。‎ ‎(2)青霉素能抑制细菌和放线菌的生长繁殖，但对酵母菌等真菌不起作用，因此添加青霉素可筛选出酵母菌。‎ ‎(3)三块平板中有两块平板长有菌落，说明含有菌株并可在培养基上生长；而其中一块平板未见菌落，说明接种不成功，可能是接种环灼烧后未冷却或未充分冷却，使菌株因温度过高而被杀死。‎ ‎(4)从β胡萝卜素酵母中提取β胡萝卜素，参照叶绿体中色素提取的方法，可添加石英砂，因为石英砂有助于研磨充分。在提取叶绿体中色素时，CaCO3的作用是中和酸性物质，防止叶绿素被分解，而β胡萝卜素较耐酸，不易被分解，故在研磨酵母细胞时无需添加CaCO3。‎