【生物】2019届一轮复习人教版专题71微生物的培养和应用教案

【生物】2019届一轮复习人教版专题71微生物的培养和应用教案

1．培养基 （1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 （2）营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对 pH、氧气以及 特殊营养物质的要求。 （3）种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。 2．无菌技术 （1）含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 （2）关键：防止外来杂菌的入侵。 （3）不同对象的无菌操作方法(连线) 3．大肠杆菌的纯化培养 （1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ①操作步骤 计算 → 称量 → 溶化 → 灭菌 → 倒平板 ②倒平板的方法及注意事项 a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。 b．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。 c．丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。 （2）纯化大肠杆菌的方法 ①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较 纯的菌种。 ②纯化大肠杆菌的关键步骤是接种。 ③常用的微生物接种方法有两种 a．平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释 分散到培养基的表面。 b．稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼 脂固体培养基的表面，进行培养。 系列稀释操作(如图所示)： 涂布平板操作(如图所示)： （3）菌种的保存方法 ①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。 ②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。 4．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 （1）分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成 无机物的过程中起到催化作用。 （2）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。 （3）实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。 5．分解纤维素的微生物的分离 （1）纤维素酶 ①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即 C1 酶、CX 酶和葡萄糖苷酶。 ②作用 纤维素――→C1 酶 CX 酶 纤维二糖―――――→ 葡萄糖苷酶 葡萄糖 （2）纤维素分解菌的筛选 ①原理 ②筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 ③培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。 ④实验流程 考向一 培养基及其制备方法分析 1．下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是 成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊红 美蓝 蒸馏水 含量 10 g 10 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 000 mL A．从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基 B．该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨 C．该培养基缺少提供生长因子的物质 D．该培养基调节合适的 pH 后就可以接种使用 【参考答案】B 错误。 解题必备 1．培养基的配制原则 （1）目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。 （2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。 （3）pH 要适宜：细菌为 6.5～7.5，放线菌为 7.5～8.5，真菌为 5.0～6.0，培养不同微生 物所需 pH 不同。学&科网 2．微生物对主要营养物质的需求特点 不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。 （1）自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的 CO2，氮源可 由含氮无机盐提供。 （2）异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮 源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。 2．高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选出了能高效生产高温淀粉酶的嗜 热菌，其筛选过程如下图所示。 （1）Ⅰ号培养基从物理状态来看，属于固体培养基，配制时要加入________作为凝固剂，从用途来看 属于选择培养基，应以________作为唯一碳源。 （2）配置固体培养基的基本步骤是__________。 A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板 （3）溶化时，烧杯中加入琼脂后要不停地________，防止琼脂糊底引起烧杯破裂。对培养基灭菌的方 法一般为____________________。 （4）①过程是__________，②过程所使用的接种方法是________________法。 （5）部分嗜热菌在Ⅰ号培养基上生长时可释放________分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈， 挑选相应的菌落，接种到Ⅱ号培养基进一步分离纯化后，再对菌种进行_______培养。 【答案】（1）琼脂 淀粉 （2）C （3）搅拌 高压蒸气灭菌 （4）稀释 涂布分离 （5）淀粉酶 扩大 菌落再分离纯化可获得相应菌种，以后可以扩大培养用于生产。 考向二 无菌技术的操作 3．微生物培养过程中，要十分重视无菌操作。现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌 污染。请分析下列操作中错误的是 ①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢 ②接种操作要在酒精灯火焰附近进行 ③无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒 ④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌 ⑤培养基要进行高压蒸汽灭菌 ⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌 A．①③ B．②④ C．③⑤ D．④⑥ 【参考答案】D 解题技巧 消毒和灭菌的辨析 项目 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 较为温和的 物理或化学 方法 仅杀死物体表面或 内部的部分对人体 有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高温的液体 化学药剂消 毒法 用酒精擦拭双手，用 氯气消毒水源 灭菌 强烈的理化 因素 杀死物体内外所有 的微生物，包括芽 孢和孢子 灼烧灭菌法 接种工具 干热灭菌法 玻璃器皿、金属工具 高压蒸汽灭 菌法 培养基及容器的灭菌 4．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些 部位的杂菌 A．接种环、手、培养基 B．高压锅、手、接种环 C．培养基、手、接种环 D．接种环、手、高压锅 【答案】C 考向三 大肠杆菌的纯化方法及过程分析 5．下图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法的操作结果。 下列叙述中错误的是 A．甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液 B．对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为 102，则所得的菌落不一定是由单一的细胞或孢子繁殖 而成 C．乙培养皿中所得的菌落都符合要求 D．乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端 【参考答案】C 归纳整合 两种纯化细菌方法的比较 项目 优点 缺点 适用范围 平板划线法 可以观察菌落特征， 对混合菌进行分离 不能计数 适用于好氧菌 稀释涂布平板法 可以计数，可以观察 菌落特征 学科￥网 吸收量较少，较 麻烦，平板不干 燥效果不好，容 易蔓延 适用于厌氧菌和兼性 厌氧菌 6．下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题。 （1）图甲是利用________法进行微生物接种，图乙是利用__________________法进行微生物接种。这 两种方法所用的接种工具分别是________和________；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法 依次是________和酒精消毒。 （2）接种操作为什么一定要在火焰附近进行？________________________________________________。 （3）接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？________________________________。 （4）如图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是________(填“图甲”或“图乙”)。 【答案】（1）平板划线 稀释涂布平板 接种环 涂布器 灼烧灭菌 （2）火焰附近存在着无菌区域 （3）避免培养过程产生的水分影响微生物的生长 （4）图乙 考向四 选择培养基成分及配制方法的分析 7．选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利 用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的 培养基分别为 A．伊红美蓝培养基、含青霉素培养基 B．含青霉素培养基、含氨的无机培养基 C．含氨的无机培养基、含青霉素培养基 D．含青霉素培养基、伊红美蓝培养基 【参考答案】B 【试题解析】酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养基进行选择培养，因为青霉素抑制细菌生长， 但不能抑制真菌生长。硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸所释放的能量，把无机 物 转 变 为 有 机 物 以 维 持 自 身 生 命 活 动 ， 利 用 含 氨 的 无 机 培 养 基 可 进 行 选 择 培 养 。 技法提炼 选择培养基的制作方法 （1）在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些微生物对某些物质的抗 性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长， 如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的 生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的 生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。 （2）通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中缺乏氮源时，可分离 自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机 碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的 CO2 制造有机物生存。 （3）利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一碳源时，可抑制不能 利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油 污染的微生物。 （4）通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高 时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高 温环境中因酶失活而无法生存。 8．苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯 酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要 步骤如图所示，①为土壤样品。请回答下列问题：[来源:] （1）②中培养目的菌株的选择培养基中应加入________作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基 ________(A ． 影 响 ； B ． 不 影 响 ) 细 菌 的 数 量 ， 如 果 要 测 定 ② 中 活 细 菌 数 量 ， 常 采 用 ____________________法。 （2）④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于_________________ __________________________________；使用______________________________法可以在⑥上获 得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是________________________________。 （3）实验过程中如何防止其他微生物的污染？_______________________________________________。 【答案】（1）苯酚 A 稀释涂布平板 （2）④的培养基没有加入苯酚作为碳源，⑤的培养基加入了苯酚作为碳源 稀释涂布平板法或平板 划线 防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基 （3）培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程进行无菌操作 括培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程进行无菌操作。 考向五 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 9．下面关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的叙述中，正确的是 A．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 B．筛选分解尿素的细菌时应以尿素作为培养基中的唯一营养物质 C．统计样品中的活菌数目时一般用平板划线法 D．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则表明筛选到了分解尿素的细菌 【参考答案】A 【试题解析】只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，A 正确；筛选分解尿素的细菌的实验中，采用的 是以尿素为唯一“氮源”的培养基，B 错误；统计样品中的活菌数目一般用稀释涂布平板法，C 错误； 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果 pH 升高，指示剂变红，这样 就能初步鉴定该种细菌能够分解尿素，D 错误。 易错警示 稀释涂布平板法计数微生物的注意问题 用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在 30～300 的平板进行计数。解题时易 出现以下误解： （1）只得到 1 个菌落数在 30～300 的平板是错误的。错误的原因是不符合实验的重复原则， 易受到偶发因素的影响。 （2）得到 3 个或 3 个以上菌落数在 30～300 的平板，也不一定正确，这可能有两种情况： ①不同平板间差异较大，如得到 3 个平板，菌落数分别为 230、34、240，虽然菌落 数均在“30～300”之间，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太 大，应重新实验找出原因。学%科网 ②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。 可见，并不是只要得到 3 个“菌落数在 30～300 的平板”即可，而应该是涂布的同 一稀释度的平板均符合“菌落数在 30～300 的平板”且无较大差异，说明实验操作 合格，才能按照计算公式进行计算。 10．下表是某同学列出的分离土壤中微生物培养基的配方，据此回答下列问题： 培养基配方 KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g 葡萄糖 10.0 g 尿素 1.0 g 琼脂 15.0 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到 1 000 mL （1）从作用上看，该培养基属于________培养基，提供氮源的物质是________，细菌能利用该氮源是 由于体内能合成________酶。 （2）在对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定时，还需在培养基中加入________指示剂，若指示剂变 ________，说明有目的菌株存在。 （3）为了测定微生物的数量，接种时应采用__________________法，某同学在 4 个培养基上分别接种 稀释倍数为 106 的土壤样液 0.1 mL，培养后菌落数分别为 180、155、176、129 个，则每毫升原土 壤样液中上述微生物的数量为________，测定的活菌数比实际活菌数________(填“低”“高” 或“基本一致”)。 【答案】（1）选择 尿素 脲(催化尿素分解的) （2）酚红 红 （3）稀释涂布平板 1.6×109 低 多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 考向六 分解纤维素的微生物的分离 11．下面从土壤中筛选纤维素分解菌的实验步骤，正确的是 ①土壤取样 ②称取 10 g 土壤加入盛有 90 mL 无菌水的锥形瓶中 ③吸取 0.1 mL 进行平板涂布 ④依次稀释至 101、102、103、104、105、106、107 稀释度 A．①→②→③→④ B．①→③→②→④ C．①→②→④→③ D．①→④→②→③ 【参考答案】C 【试题解析】在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(10 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不 同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。 解题技巧 两种微生物筛选方法的比较 项目 土壤中分解尿素的细菌的分离 分解纤维素的微生物的分离 方法 使用以尿素为唯一氮源的选择培 养基进行培养 利用富含纤维素的选择培养基进 行培养 原理 土壤中不能分解尿素的微生物因 缺乏脲酶而不能正常生长，能够分 解尿素的微生物能利用尿素为氮 源正常生长，从而起到选择作用 因为培养基中含有丰富的纤维素， 因此能够分解纤维素的微生物具 有更多的生存机会而大量繁殖 特有 代表 过程 CO(NH2)2＋H2O――→ 脲酶 CO2＋ 2NH3 纤维素 ――→C1 酶、CX 酶 纤维二糖 ――→ 葡萄糖苷酶葡萄糖 12．植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列相关问题： （1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由 3 种组分形成的复合酶，其中的葡萄糖苷 酶可将______________分解成______________。 （2）在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)染料时，CR 可与纤维素形成________色复合物。用含有 CR 的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的________。 （3）为从富含纤维素分解菌的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落并加以鉴定，某同学设计了甲、 乙两种培养基： 酵母膏 无机盐 淀粉 纤维素粉 琼脂 CR 溶液 水 培养基甲 ＋ ＋ － ＋ － ＋ ＋ 培养基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋[来源:] ＋ ＋ 注：“＋”表示“有”，“－”表示“无”。 据 表 判 断 ， 培 养 基 甲 ________( 填 “能 ”或 “ 不 能 ”) 用 于 分 离 纤 维 素 分 解 菌 ， 原 因 是 __________________________________________；培养基乙________(填“能”或“不能”)用于 鉴定纤维素分解菌，原因是__________________________________________。 【答案】（1）纤维二糖 葡萄糖 （2）红 透明圈 （3）不能 液体培养基不能分离单菌落 不能 培养基中没有纤维素(不能形成 CR－纤维素红 色复合物) 1．下列关于微生物的分离和培养的有关叙述，错误的是 A．微生物培养前，需对培养基进行消毒 B．分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度 C．测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法 D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源 2．下列有关常见无菌操作的叙述，错误的是 A．用酒精擦拭双手 B．用氯气对水源消毒 C．实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭 3．用平板划线法或稀涂布平板法都可以纯化大肠杆菌，二者的共同点是 A．都可以用固体培养基或液体培养基 B．都需要使用接种环进行接种 C．接种时都需要在酒精灯的火焰旁进行 D．都可以用来统计样品中的活菌数 4．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是 A．培养基分装到培养皿后进行高压蒸汽灭菌 B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D．培养过程中每隔一周观察三次菌落生长 5．通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物 无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入 10%的酚可以抑制细菌和霉 菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出 ①大肠杆菌 ②霉菌 ③放线菌 ④固氮细菌 A．④③② B．④②③ C．④①② D．④②① 6．下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中不正确的是 A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板 B．取 102、103、104 倍的土壤稀释液和无菌水各 0.1 mL，分别涂布于各组平板上 C．将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养 24~48 h D．应该选择菌落数在 30~300 的实验组平板进行计数 7．如图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程，其中 LB 培养基能使菌种成倍扩增，以下说法正确的是 A．需要对活性污泥作灭菌处理 B．②中 LB 培养基应以甲醛为唯一碳源 C．目的菌种异化作用类型为厌氧型 D．经⑤处理后，应选择瓶中甲醛浓度最低的一组进一步纯化培养 8．如图所示，自来水经滤膜过滤后，转移到牛肉膏蛋白胨培养基上，适宜条件下培养 48 h，染色后统计变 色菌落数目为 165 个。下列说法正确的是 A．若培养基含伊红—美蓝，大肠杆菌菌落呈蓝绿色 B．自来水中大肠杆菌浓度是 33 个·L-1，比真实值偏大 C．为了提高准确度，需设重复实验，但不用空白对照 D．若培养基菌落数目大于 300，可适当减少自来水量 9．尿素是一种高浓度氮肥，长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后，才能被 植物吸收利用。分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解。某同学要分离土壤中能分解尿素 的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：学%科￥网 KH2pO4 Na2HPO4 MgS04·7H2O 蛋白胨 葡萄糖 尿素 琼脂[] 1.4 g 2.1 g 0.2 g l.0 g 10.0 g l.0 g 15.0 g （1）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌_______(填“能”或“不能”）， 原因是_____________________，不能选择出只分解以尿素为氮源的微生物。 （2）接种前要对培养基进行_______。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在______条件下进行。 （3）一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是________________， 应当怎样操作才可避免此种现象？___________________________。 （4）获取分解尿素的细菌后，如要临时保存，可将其接种在___________培养基上，等长成菌落后放在 4 ℃的冰箱中保存。若要长期保存，可以采用___________的方法。 10．聚对苯二甲酸乙二酯(PET)是塑料类水瓶的重要原料，科学家发现了以 PET 为碳源和能量来源的细菌， 该发现对 PET 类材料的回收利用、环境治理意义重大。请回答下列问题： （1）实验小组欲从土壤中获取 PET 降解菌，需将土壤样品置于________为唯一碳源的培养基中进行选 择培养，其目的是______________。 （2）该实验小组选取 PET 浓度为 800mg·L-1 的富集液进行系列稀释，分别取 10-3、10-4 和 10-5 倍数的稀 释液 0.1 mL 涂布于培养基上，每个稀释倍数涂布三个平板，各平板的菌落数分别为（286、298、 297)，(35、32、31)，(36、7、2)，不适合用于计数的为________倍数的稀释液，用另外两组稀释 倍数的稀释液进行计数得到的细菌数不一致的原因可能是__________________________。 （3）倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是________。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿 盖与皿底之间的部位，则这个平板不能用来培养大肠杆菌，原因是____________。用平板划线法 纯化 PET 降解菌的过程中，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划线，原 因是__________。 （4）在保藏 PET 降解菌菌种时，可采取____________的方法进行长期保存。 11．（2017·新课标Ⅰ卷）某些土壤细菌可将尿素分解成 CO2 和 NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题： （1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生________________________。能分解 尿素的细菌不能以尿素的分解产物 CO2 作为碳源，原因是________________________，但可用葡 萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是____________________（答出两点即可）。 （2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择________________（填“尿素”“NH4NO3” 或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是________________________。 （3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有 KH2PO4 和 Na2 HPO4，其作用有________________________ （答出两点即可）。 12．（2016·课标 1 卷）空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收 集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下： ①配置培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）； ②制作无菌平板； ③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作； ④将各组平板置于 37 ℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。 回答下列问题： （1）该培养基中微生物所需的氮来源于_________________。若要完成步骤②，该培养基中的成分 X 通常是_________________。 （2）步骤③中，实验组的操作是_________________。 （3）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为 36 个/平板，而空白对照组的一个平板上出现 了 6 个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了_________________现象。若将 30（即 36-6）个/ 平板作为本组菌落数的平均值，该做法_______________（填“正确”或“不正确”）。 1．【答案】A 也可用显微镜直接计数法，C 正确；分离能分解尿素的细菌，应用选择培养基，以尿素作为培养基中唯 一的氮源，D 正确。 2．【答案】D 【解析】用酒精擦拭双手属于化学药剂消毒，A 正确；用氯气消毒水源属于化学药剂消毒，B 正确；实 验操作应在酒精灯火焰附近，因为高温防止杂菌污染，C 正确；玻璃器皿（吸管、培养皿）等应用干热 灭菌，酒精擦拭属于消毒，不能杀灭所有微生物，D 错误。 3．【答案】C 4．【答案】B 【解析】在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板，A 错误；灼烧接种环可以防止残留菌种对实验的干 扰，因此转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌再进行划线，B 正确；接种后放置在恒温培养箱中进 行培养，C 错误；微生物的繁殖速度快，培养过程中一般要隔天观察一次，D 错误。 5．【答案】B 【解析】在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，但固氮细菌的氮源是氮气，可在该培养基上正 常生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌，则霉菌等真菌可正常生长；在培养基中加入 10% 的酚可以抑制细菌和霉菌，但不影响放线菌的生长。故选 B。 6．【答案】B 【解析】检测土壤中细菌总数，应该进行计数，首先要进行培养基的制备，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨 培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，A 正确；取 104、105、106 倍的土壤稀释液和无菌水各 0.1 mL， 分别涂布于各组平板上，B 错误；将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养 24～48 小时，C 正确； 确定对照组无菌后，选择菌落数在 30～300 的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数， D 正确。 7．【答案】D 【解析】该实验是从活性污泥中分离和纯化分解甲醛细菌，则活性污泥不能灭菌，A 错误；LB 培养基 使菌种成倍扩增，应用完全培养基培养，B 错误；图示分解甲醛细菌是在培养皿中进行的，属于需氧型 细菌，C 错误；经⑤处理后，瓶中甲醛浓度降低，甲醛浓度最低的一组中分解甲醛细菌纯度最高，可进 一步纯化培养，D 正确。 8．【答案】D 【解析】若培养基含伊红—美蓝，大肠杆菌菌落呈黑色或紫黑色，有金属光泽，A 错误；自来水中大肠 杆菌浓度是 165÷5=33 个/L，由于两个或多个大肠杆菌可能长成一个菌落，因此比真实值偏小，B 错误； 为了提高准确度，需设重复实验，同时需要设置空白对照，C 错误；若培养基菌落数目大于 300，说明 细菌数目较多，可适当减少自来水量，D 正确。 9．【答案】（1）不能 培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源 （2）灭菌 无菌 （3）菌液浓度过高 对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数） （4）固体斜面 甘油管藏 的冰箱中保藏。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。 10．【答案】（1）PET 增加 PET 降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌 （2）10-5 稀释倍数为 10-3 时，更多的菌落连在一起，最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为 10-4 组的结果 （3）灭菌，防止微生物污染 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 使细菌数 目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落 （4）甘油管藏 【解析】（1）欲从土壤中获取 PET 降解菌，需将土壤样品置于以 PET 为唯一碳源的培养基中进行选 择培养，其目的是增加 PET 降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌。（2）为了保证结果准确，一般 选择菌落数在 30～300 的平板进行计数，据此结合题意可知：不适合用于计数的为 10-5 倍数的稀释液。 用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数，得到的细菌数不一致的原因可能是稀释倍数为 10-3 时，更多 的菌落连在一起，最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为 10-4 组的结果。（3）倒平板时应使锥形 瓶的瓶口通过火焰，其目的是灭菌，防止微生物污染。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿 底之间的部位，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此这个平板不能用来培养 大肠杆菌。用平板划线法纯化 PET 降解菌的过程中，为使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少， 最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划 线。（4）对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。 11．【答案】（1）脲酶 分解尿素的细菌是异养型生物，不能利用 CO2 来合成有机物 为细胞生物生 命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料 （2）尿素 其他两组都含有 NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用 NH4NO3， 不能起到筛选作用 （3）为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中 pH 稳定 可作为缓冲剂保持细胞生长过程中 pH 稳定。学科%网 12．【答案】（1）牛肉膏、蛋白胨 琼脂 （2）将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间 （3）污染 不正确 【解析】（1）依据配制培养基的成分可知，该培养基中微生物所需的氮来源于牛肉膏、蛋白胨。因为 该实验是 “用平板收集教室空气中的微生物”，所使用的培养基应为固体培养基，配制时，需加入凝固 剂，据此推知，该培养基中的成分 X 通常是琼脂。（2）依题意可知，该实验的目的是，用平板收集 教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。所以步骤③中，实验组的操 作是，将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间，以收集教室不同高度 空气中的微生物。（3）设置的空白对照组，在整个实验过程中没有用来收集空气中的微生物，若 空白对照组的一个平板上出现了 6 个菌落，说明培养基的配制是不成功的，在此次调查中出现了污染现 象，所以若将 30（即 36－6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法不正确。