2019-2020学年人教版生物选修一同步导学限时训练5　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

2019-2020学年人教版生物选修一同步导学限时训练5　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

限时规范训练五 1.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( ) A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水 C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水 D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水 答案 A 解析 能选择出分解尿素的细菌的培养基必须以尿素为唯一氮源，B、 D 两项不符合。C 项缺少有机碳源，分解尿素的微生物不能正常生长。 2.从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中 一定有( ) ①尿素 ②有机氮化物 ③无机盐 ④有机碳化物 ⑤水 ⑥无机碳化物 A.①③④⑤ B.②③④⑤ C.①③⑤⑥ D.②③⑤⑥ 答案 A 解析 分离能分解尿素的细菌，故培养基中应以尿素为唯一氮源，另 外，水、无机盐和碳源、能源是细菌生长所必不可少的。有机碳在这 里既是碳源又是能源，因为分解尿素的细菌是异养微生物，所以不能 利用无机碳化物。 3.测定土壤中细菌数量一般选用 104、105 和 106 倍的稀释液进行平板 培养，而测定真菌的数量一般选用 102、103 和 104 倍稀释液，其原因 是( ) A.细菌个体小，真菌个体大 B.细菌易稀释，真菌不易稀释 C.细菌在土壤中数量比真菌多 D.随机的，没有原因 答案 C 解析 土壤中的微生物大约 70%～90%是细菌，真菌的数量比细菌数 量少。样品的稀释度越高，在平板上生长的菌落数目就越少。在实际 操作中，通常选用一定稀释范围内的样品液进行培养，以保证获得菌 落数在 30～300 之间，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真 菌的稀释倍数。 4.想要对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数，下列操作需要在酒 精灯火焰旁进行的有( ) ①土壤取样 ②称取土壤 ③稀释土壤溶液 ④涂布平板 ⑤微生物的培养 A.①②③④⑤ B.②③④⑤ C.③④⑤ D.②③④ 答案 D 解析 对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数时，称取土壤、稀释 土壤溶液和涂布平板都在火焰旁进行；土壤取样在野外进行；微生物 的培养在恒温箱中进行。 5.产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是( ) A 一个细菌、液体培养基 B.许多细菌、液体培养基 C.一个细菌、固体培养基 D.许多细菌、固体培养基 答案 C 解析 菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体，形成于固体培养基 上，有一定的形态结构，因此肉眼可见。同种细菌形成的菌落，形态 结构是相同的。由多种细菌形成的菌落，不可能具有比较标准的形态， 因为这些细菌不是同一种细菌，也不可能在培养基的同一个点上。 6.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数 为 106 的培养基中，得到以下几种统计结果，可用于计数的为( ) A.涂布了一个平板，统计的菌落数是 230 B.涂布了两个平板，统计的菌落数是 215 和 260，取平均值 238 C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 21、212 和 256，取平均值 163 D.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 210、240 和 256，取平均 值 235 答案 D 解析 在设计实验时，一定要涂布至少三个平板，作为重复组，才能 增强实验的说服力与准确性；C 项中虽涂布了三个平板，但是，其中 一个平板的计数结果与另两个相差太大，说明在操作过程中可能出现 了失误，因此不能用这三个平板的计数来求平均值。 7.下图是从葡萄果实上获取酵母菌菌种的简要操作步骤。在下列相关 叙述中不正确的是( ) 葡萄果实―--------―→ 无菌水冲洗 ① 收集冲洗液――→ 接种 ② 选择培养基培养―----―→ 挑选菌体 ③ 扩大培养 A.图中接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法 B.图中①②③步骤都必须确保是无菌操作 C.图中选择培养基为固体，而扩大培养的培养基为液体 D.扩大培养酵母菌过程中为加快酵母菌繁殖需要通入空气 答案 D 解析 微生物培养中，常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板 法，A 项正确；微生物培养过程必须保证无菌操作，以防止杂菌污染， 确保目的菌种的大量繁殖，B 项正确；在进行酵母菌筛选时常用固体 培养基，进行扩大培养时常用液体培养基，C 项正确；酵母菌为兼性 厌氧微生物，在扩大培养酵母菌时，为加快酵母菌繁殖需通入无菌空 气，否则会造成杂菌污染，D 项错误。 8.多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物，为油状液体，污染土 壤后，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用。为 消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯 联苯的菌株。 (1)筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品________，接种到以 ________为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于 ________。 (2)对初步提取到的菌株要进行________，一般操作方法有两种，如 图是________法。 (3)若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下直接计数。若用 ________法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平 板进行培养一段时间，这样做的目的是________________________ ________________________________________________。 (4)将 1 mL 酵母菌溶液稀释 100 倍，在 3 个平板上用稀释涂布平板法 分别接入 0.1 mL 稀释液，经适当培养后，3 个平板上的菌落数分别 为 56、57、58，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为________。 答案 (1)稀释(或溶解) 多氯联苯 选择培养基 (2)纯化 平板划线 (3)稀释涂布平板 检验培养基平板灭菌时是否成功(或倒平板时是 否感染杂菌或是否彻底灭菌) (4)5.7×107 个 解析 (1)由题意可知：筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品 稀释(溶解)后接种到以多氯联苯为唯一碳源的培养基上。在该培养基 中，只有能降解多氯联苯的微生物才能生长，而其他微生物不能生长， 所以从功能上讲，该培养基属于选择培养基。(2)对初步提取到的菌 株要进行纯化。图中采用的操作方法是平板划线法。(3)若要测定培 养液中酵母菌的菌体数，既可在显微镜下用血细胞计数板直接计数， 也可选用稀释涂布平板法统计活菌数目。在涂布接种前，随机取若干 灭菌后的空白平板培养一段时间，其目的是检验培养基平板灭菌是否 成功(或倒平板时是否感染杂菌或是否彻底灭菌)。(4)将 1 mL 酵母菌 溶液稀释 100 倍，在 3 个平板上用稀释涂布平板法分别接入 0.1 mL 稀释液，经适当培养后，3 个平板上的菌落数分别为 56、57、58，据 此 可 得 出 每 升 溶 液 中 酵 母 菌 活 菌 数 为 (56 ＋ 57 ＋ 58)÷3÷0.1×100×103＝5.7×107 个。 9.给无氮培养基接种土壤稀泥浆的正确方法是( ) A.打开培养皿盖，取一根接种环沾取少许稀泥浆，轻轻地点接在培养 基的表面上 B.取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后沾取少许稀泥浆，略微打开 培养皿盖，在培养基的表面轻点 C.打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后沾取少许稀 泥浆，在培养基的表面轻点 D.略微打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌，冷却后 沾取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点 答案 D 解析 接种过程中要防止外来杂菌的入侵，左手将培养皿打开一条缝 隙，右手将接种环在火焰上灭菌，冷却后沾取少许稀泥浆，在培养基 的表面轻点，用未冷却的接种环沾取稀泥浆会杀灭菌种。 10.实验测定链霉素对 3 种细菌的抗生素效应，用 3 种细菌在事先准 备好的琼脂平板上画 3 条等长的平行线(3 条线均与图中的链霉素带 接触)，将平板置于 37 ℃条件下恒温培养 3 天，结果如图所示。从 实验结果分析，以下叙述不正确的是( ) A.链霉素能阻止结核杆菌的生长 B.链霉素对结核杆菌比对霍乱菌更有效 C.链霉素对结核杆菌比对伤寒菌更有效 D.链霉素可以用于治疗伤寒病人 答案 D 解析 由题图可知，此培养基含有链霉素，该培养基上接种的三种细 菌中，霍乱菌和结核杆菌都可以被链霉素杀灭，并且链霉素对结核杆 菌杀灭的有效程度大于对霍乱菌的有效程度，而伤寒菌的生长不受链 霉素影响，所以 D 项错误。 11.三个培养皿中分别加入 10 mL 不同的培养基，然后接种相同的大 肠杆菌样液。培养 36 h 后，计算菌落数，结果如下表。下列相关叙 述正确的是( ) 培养皿 培养基成分 菌落数 Ⅰ 琼脂、葡萄糖 35 Ⅱ 琼脂、葡萄糖、生长因子 250 Ⅲ 琼脂、生长因子 0 A.该实验采用的是液体培养基 B.该实验采用平板划线法接种 C.Ⅰ和Ⅲ对照，说明大肠杆菌的生长不需要生长因子 D.Ⅱ和Ⅲ对照，说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖 答案 D 解析 培养基中加入了琼脂，故为固体培养基；对微生物进行计数时 宜采用稀释涂布平板法接种；Ⅰ与Ⅲ中有葡萄糖、生长因子两种变量， 不能得出相应结论；Ⅱ和Ⅲ对照，自变量是有无葡萄糖，且经培养后， Ⅱ中菌落数为 250，Ⅲ中菌落数为 0，说明大肠杆菌的生长需要葡萄 糖。 12.苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚 的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚， 研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的 主要步骤如图所示，①为土壤样品。下列相关叙述错误的是( ) A.图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源 B.如果要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法 C.若图中④为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源 D.使用平板划线法可以在⑥上获得单菌落 答案 C 解析 用苯酚作为选择培养基中的碳源和能源物质，会影响其他微生 物生长。测定培养液中活细菌数目常采用稀释涂布平板法。若④为对 照实验，则④中应含除苯酚外的其他碳源，⑤以苯酚作为唯一碳源。 使用稀释涂布平板法或平板划线法都可以在⑥上获得单菌落。 13.广东省是我国甘蔗生产区之一。甘蔗是一种高光效的 C4 植物，单 位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精 生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗→ 榨汁(蔗糖)→酵母发酵→蒸馏→成品(燃料酒精)。 (1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生 酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及 筛选过程如下： 步骤 1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。 步 骤 2 ： 制 备 选 择 培 养 基 。 在 基 本 培 养 基 的 基 础 上 ， 注 意 ______________和________，加琼脂后灭菌，制成固体平板。 步骤 3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。 步骤 4：根据________________________________________________ ____________________________________________，筛选出突变菌。 (2)上述步骤 2、3 和 4 的依据分别是___________________________ __________________________________________________________ __________________________________________________________ _______________。 答案 (1)添加高浓度蔗糖(葡萄糖) 调低 pH 是否能在选择培养 基上生长 (2)提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；能生长的菌落具有耐 高糖和耐酸的特性 解析 (1)要筛选耐高糖和耐酸的菌种，培养基中必须加入高浓度蔗 糖并调低 pH，能在选择培养基上生长的菌体即为所需菌种。(2)步骤 2 是给其提供高糖和酸性的筛选环境；步骤 3 是为了获得单菌落；步 骤 4 是根据能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性筛选出突变菌。 14.某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物 A。 研究人员用化合物 A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成 功筛选到能高效降解化合物 A 的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图 所示。请分析回答下列问题： (1)培养基中加入化合物 A 的目的是筛选________，这种培养基属于 ________培养基。 (2)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的________，实验 需要振荡培养，由此推测目的菌的代谢类型是异养________(填“需 氧”或“厌氧”)型。 (3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物 A 含量________的培养液， 接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量________(两空均填 “增加”或“减少”)。 (4)转为固体培养基时，常采用________和稀释涂布平板法进行接种， 在前一种方法接种过程中所用的接种工具是________，这种工具在操 作时采用的灭菌方法是________。 (5)某同学计划统计污水池中目的菌的总数，他选用 104、105、106 稀 释液进行涂布平板，每种稀释液都设置 3 个重复组，各吸取 0.1 mL 稀释液涂布平板，在适宜条件下培养一段时间后，对平板的菌落数进 行统计，结果如下： 稀释度/倍 104 105 106 平板 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平板菌落数/个 432 421 445 78 67 74 9 6 8 为了保证结果准确，应选择上述稀释________倍的平板菌落数作为统 计结果，计算出每毫升样品中目的菌菌株数为________个。 (6)测定微生物的数量常采用____________法，其统计的数值往往比 实际数目低，原因是________________________________________ __________________________________________________________ _________________________________________________________。 答案 (1)目的菌 选择 (2)化合物 A 需氧 (3)减少 增加 (4)平板划线法 接种环 灼烧灭菌 (5)105 7.3×107 (6)稀释涂布平板 两个或多个细胞连在一起时，观察到的只是一个 菌落 解析 (1)培养基中加入化合物 A 的目的是筛选目的菌，这种培养基 属于选择培养基。(2)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中 的化合物 A，因为除了化合物 A，培养基的成分中没有其他的氮源和 碳源。实验需要振荡培养，振荡可以增大培养液中的溶氧量，由此推 测目的菌的代谢类型是异养需氧型。(3)培养若干天后，应选择培养 瓶中化合物 A 含量减少的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目 的菌的数量增大。(4)接种用到的方法一般有平板划线法和稀释涂布 平板法，前一种方法的接种工具是接种环，这种工具在操作时采用的 灭菌方法为灼烧灭菌。(5)应选取菌落数在 30～300 之间的平板进行 计数，所以稀释 105 倍的平板符合要求，则每毫升样品中目的菌菌株 数为(78＋67＋74)÷3÷0.1×105＝7.3×107 个。(6)利用稀释涂布平 板法计算的活菌数比实际值偏小，因为可能有两个或多个细胞形成一 个菌落。 15.蛋白酶在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值。 某同学为筛选产蛋白酶的高产菌株，做了如下实验步骤(配制了下列 培养基，在适宜条件下培养)： 步骤 取样 培养基 培养结果 Ⅰ 土壤 样品 葡萄糖、(NH4)2SO4、K2HPO4·3H2O、 KH2PO4、NaCl、CaCl2、MgSO4·7H2O， 加水定容 培养液 a Ⅱ 1 mL 培养液 a 同上 菌落 Ⅲ 挑取 单菌落 细菌培养基 培养液 b (1)为实现筛选目的，步骤Ⅰ所使用的培养基配方中，应去除________ 并加入高浓度的________。 (2)为实现目的菌的分离和计数，步骤Ⅱ所使用的培养基中还应加入 ________制成平板，采用的接种方法是______________，实验结果如 图 A。 (3)步骤Ⅲ应挑取图 A 中________处的菌落，本步骤的目的是 __________________________________________________________ ______________。 (4)图 B 是该蛋白酶和其他酶的热稳定性数据，即酶在不同温度下保 温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性。在该蛋白酶 的工业化生产过程中，通常需对发酵液在 60～70 ℃条件下保温一定 时间，其作用是____________________________________________ ______________________________________________。 答案 (1)葡萄糖 蛋白质 (2)琼脂 稀释涂布平板法 (3)a 快速增加目的菌的种群数量(扩大培养) (4)大幅度降低发酵液中其他酶的活性 解析 (1)培养基中添加特定的成分以促进目标微生物生长而抑制其 他微生物生长，用于进行微生物筛选。由题意可知，为筛选产蛋白酶 的高产菌株，步骤Ⅰ所使用的培养基配方中，应去除葡萄糖并加入高 浓度的蛋白质。(2)为实现目的菌的分离和计数，步骤Ⅱ所使用的培 养基中还应加入琼脂(凝固剂)制成平板，采用的接种方法为稀释涂布 平板法。(3)图 A 中 a 处的菌落透明圈最大，故其菌种分解蛋白质的 能力最强，所以步骤Ⅲ应挑取图 A 中 a 处的菌落，本步骤的目的是快 速增加目的菌的种群数量(即扩大培养)。(4)图 B 曲线表明，60～ 70 ℃条件下，蛋白酶的活性维持在较高水平，而此时其他酶的活性 很低，因此在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需将发酵液在 60 ～70 ℃条件下保温一定时间，可大幅度降低发酵液中其他酶的活性。 限时规范训练五 1.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( ) A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水 C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水 D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水 答案 A 解析 能选择出分解尿素的细菌的培养基必须以尿素为唯一氮源，B、 D 两项不符合。C 项缺少有机碳源，分解尿素的微生物不能正常生长。 2.从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中 一定有( ) ①尿素 ②有机氮化物 ③无机盐 ④有机碳化物 ⑤水 ⑥无机碳化物 A.①③④⑤ B.②③④⑤ C.①③⑤⑥ D.②③⑤⑥ 答案 A 解析 分离能分解尿素的细菌，故培养基中应以尿素为唯一氮源，另 外，水、无机盐和碳源、能源是细菌生长所必不可少的。有机碳在这 里既是碳源又是能源，因为分解尿素的细菌是异养微生物，所以不能 利用无机碳化物。 3.测定土壤中细菌数量一般选用 104、105 和 106 倍的稀释液进行平板 培养，而测定真菌的数量一般选用 102、103 和 104 倍稀释液，其原因 是( ) A.细菌个体小，真菌个体大 B.细菌易稀释，真菌不易稀释 C.细菌在土壤中数量比真菌多 D.随机的，没有原因 答案 C 解析 土壤中的微生物大约 70%～90%是细菌，真菌的数量比细菌数 量少。样品的稀释度越高，在平板上生长的菌落数目就越少。在实际 操作中，通常选用一定稀释范围内的样品液进行培养，以保证获得菌 落数在 30～300 之间，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真 菌的稀释倍数。 4.想要对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数，下列操作需要在酒 精灯火焰旁进行的有( ) ①土壤取样 ②称取土壤 ③稀释土壤溶液 ④涂布平板 ⑤微生物的培养 A.①②③④⑤ B.②③④⑤ C.③④⑤ D.②③④ 答案 D 解析 对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数时，称取土壤、稀释 土壤溶液和涂布平板都在火焰旁进行；土壤取样在野外进行；微生物 的培养在恒温箱中进行。 5.产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是( ) A 一个细菌、液体培养基 B.许多细菌、液体培养基 C.一个细菌、固体培养基 D.许多细菌、固体培养基 答案 C 解析 菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体，形成于固体培养基 上，有一定的形态结构，因此肉眼可见。同种细菌形成的菌落，形态 结构是相同的。由多种细菌形成的菌落，不可能具有比较标准的形态， 因为这些细菌不是同一种细菌，也不可能在培养基的同一个点上。 6.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数 为 106 的培养基中，得到以下几种统计结果，可用于计数的为( ) A.涂布了一个平板，统计的菌落数是 230 B.涂布了两个平板，统计的菌落数是 215 和 260，取平均值 238 C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 21、212 和 256，取平均值 163 D.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 210、240 和 256，取平均 值 235 答案 D 解析 在设计实验时，一定要涂布至少三个平板，作为重复组，才能 增强实验的说服力与准确性；C 项中虽涂布了三个平板，但是，其中 一个平板的计数结果与另两个相差太大，说明在操作过程中可能出现 了失误，因此不能用这三个平板的计数来求平均值。 7.下图是从葡萄果实上获取酵母菌菌种的简要操作步骤。在下列相关 叙述中不正确的是( ) 葡萄果实 ――→无菌水冲洗 ① 收集冲洗液――→接种 ② 选择培养基培养 ――→挑选菌体 ③ 扩 大培养 A.图中接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法 B.图中①②③步骤都必须确保是无菌操作 C.图中选择培养基为固体，而扩大培养的培养基为液体 D.扩大培养酵母菌过程中为加快酵母菌繁殖需要通入空气 答案 D 解析 微生物培养中，常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板 法，A 项正确；微生物培养过程必须保证无菌操作，以防止杂菌污染， 确保目的菌种的大量繁殖，B 项正确；在进行酵母菌筛选时常用固体 培养基，进行扩大培养时常用液体培养基，C 项正确；酵母菌为兼性 厌氧微生物，在扩大培养酵母菌时，为加快酵母菌繁殖需通入无菌空 气，否则会造成杂菌污染，D 项错误。 8.多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物，为油状液体，污染土 壤后，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用。为 消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯 联苯的菌株。 (1)筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品________，接种到以 ________为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于 ________。 (2)对初步提取到的菌株要进行________，一般操作方法有两种，如 图是________法。 (3)若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下直接计数。若用 ________法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平 板 进 行 培 养 一 段 时 间 ， 这 样 做 的 目 的 是 __________________________________________________________ ______________。 (4)将 1 mL 酵母菌溶液稀释 100 倍，在 3 个平板上用稀释涂布平板法 分别接入 0.1 mL 稀释液，经适当培养后，3 个平板上的菌落数分别 为 56、57、58，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为________。 答案 (1)稀释(或溶解) 多氯联苯 选择培养基 (2)纯化 平板划线 (3)稀释涂布平板 检验培养基平板灭菌时是否成功(或倒平板时是 否感染杂菌或是否彻底灭菌) (4)5.7×107 个 解析 (1)由题意可知：筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品 稀释(溶解)后接种到以多氯联苯为唯一碳源的培养基上。在该培养基 中，只有能降解多氯联苯的微生物才能生长，而其他微生物不能生长， 所以从功能上讲，该培养基属于选择培养基。(2)对初步提取到的菌 株要进行纯化。图中采用的操作方法是平板划线法。(3)若要测定培 养液中酵母菌的菌体数，既可在显微镜下用血细胞计数板直接计数， 也可选用稀释涂布平板法统计活菌数目。在涂布接种前，随机取若干 灭菌后的空白平板培养一段时间，其目的是检验培养基平板灭菌是否 成功(或倒平板时是否感染杂菌或是否彻底灭菌)。(4)将 1 mL 酵母菌 溶液稀释 100 倍，在 3 个平板上用稀释涂布平板法分别接入 0.1 mL 稀释液，经适当培养后，3 个平板上的菌落数分别为 56、57、58，据 此 可 得 出 每 升 溶 液 中 酵 母 菌 活 菌 数 为 (56 ＋ 57 ＋ 58)÷3÷0.1×100×103＝5.7×107 个。 9.给无氮培养基接种土壤稀泥浆的正确方法是( ) A.打开培养皿盖，取一根接种环沾取少许稀泥浆，轻轻地点接在培养 基的表面上 B.取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后沾取少许稀泥浆，略微打开 培养皿盖，在培养基的表面轻点 C.打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后沾取少许稀 泥浆，在培养基的表面轻点 D.略微打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌，冷却后 沾取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点 答案 D 解析 接种过程中要防止外来杂菌的入侵，左手将培养皿打开一条缝 隙，右手将接种环在火焰上灭菌，冷却后沾取少许稀泥浆，在培养基 的表面轻点，用未冷却的接种环沾取稀泥浆会杀灭菌种。 10.实验测定链霉素对 3 种细菌的抗生素效应，用 3 种细菌在事先准 备好的琼脂平板上画 3 条等长的平行线(3 条线均与图中的链霉素带 接触)，将平板置于 37 ℃条件下恒温培养 3 天，结果如图所示。从 实验结果分析，以下叙述不正确的是( ) A.链霉素能阻止结核杆菌的生长 B.链霉素对结核杆菌比对霍乱菌更有效 C.链霉素对结核杆菌比对伤寒菌更有效 D.链霉素可以用于治疗伤寒病人 答案 D 解析 由题图可知，此培养基含有链霉素，该培养基上接种的三种细 菌中，霍乱菌和结核杆菌都可以被链霉素杀灭，并且链霉素对结核杆 菌杀灭的有效程度大于对霍乱菌的有效程度，而伤寒菌的生长不受链 霉素影响，所以 D 项错误。 11.三个培养皿中分别加入 10 mL 不同的培养基，然后接种相同的大 肠杆菌样液。培养 36 h 后，计算菌落数，结果如下表。下列相关叙 述正确的是( ) 培养 皿 培养基成分 菌落 数 Ⅰ 琼脂、葡萄糖 35 Ⅱ 琼脂、葡萄糖、生长 因子 250 Ⅲ 琼脂、生长因子 0 A.该实验采用的是液体培养基 B.该实验采用平板划线法接种 C.Ⅰ和Ⅲ对照，说明大肠杆菌的生长不需要生长因子 D.Ⅱ和Ⅲ对照，说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖 答案 D 解析 培养基中加入了琼脂，故为固体培养基；对微生物进行计数时 宜采用稀释涂布平板法接种；Ⅰ与Ⅲ中有葡萄糖、生长因子两种变量， 不能得出相应结论；Ⅱ和Ⅲ对照，自变量是有无葡萄糖，且经培养后， Ⅱ中菌落数为 250，Ⅲ中菌落数为 0，说明大肠杆菌的生长需要葡萄 糖。 12.苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚 的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚， 研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的 主要步骤如图所示，①为土壤样品。下列相关叙述错误的是( ) A.图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源 B.如果要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法 C.若图中④为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源 D.使用平板划线法可以在⑥上获得单菌落 答案 C 解析 用苯酚作为选择培养基中的碳源和能源物质，会影响其他微生 物生长。测定培养液中活细菌数目常采用稀释涂布平板法。若④为对 照实验，则④中应含除苯酚外的其他碳源，⑤以苯酚作为唯一碳源。 使用稀释涂布平板法或平板划线法都可以在⑥上获得单菌落。 13.广东省是我国甘蔗生产区之一。甘蔗是一种高光效的 C4 植物，单 位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精 生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗→ 榨汁(蔗糖)→酵母发酵→蒸馏→成品(燃料酒精)。 (1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生 酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及 筛选过程如下： 步骤 1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。 步 骤 2 ： 制 备 选 择 培 养 基 。 在 基 本 培 养 基 的 基 础 上 ， 注 意 ______________和________，加琼脂后灭菌，制成固体平板。 步骤 3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。 步 骤 4 ： 根 据 __________________________________________________________ ______________， 筛选出突变菌。 (2) 上 述 步 骤 2 、 3 和 4 的 依 据 分 别 是 __________________________________________________________ ______________ __________________________________________________________ ______________。 答案 (1)添加高浓度蔗糖(葡萄糖) 调低 pH 是否能在选择培养 基上生长 (2)提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；能生长的菌落具有耐 高糖和耐酸的特性 解析 (1)要筛选耐高糖和耐酸的菌种，培养基中必须加入高浓度蔗 糖并调低 pH，能在选择培养基上生长的菌体即为所需菌种。(2)步骤 2 是给其提供高糖和酸性的筛选环境；步骤 3 是为了获得单菌落；步 骤 4 是根据能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性筛选出突变菌。 14.某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物 A。 研究人员用化合物 A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成 功筛选到能高效降解化合物 A 的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图 所示。请分析回答下列问题： (1)培养基中加入化合物 A 的目的是筛选________，这种培养基属于 ________培养基。 (2)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的________，实验 需要振荡培养，由此推测目的菌的代谢类型是异养________(填“需 氧”或“厌氧”)型。 (3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物 A 含量________的培养液， 接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量________(两空均填 “增加”或“减少”)。 (4)转为固体培养基时，常采用________和稀释涂布平板法进行接种， 在前一种方法接种过程中所用的接种工具是________，这种工具在操 作时采用的灭菌方法是________。 (5)某同学计划统计污水池中目的菌的总数，他选用 104、105、106 稀 释液进行涂布平板，每种稀释液都设置 3 个重复组，各吸取 0.1 mL 稀释液涂布平板，在适宜条件下培养一段时间后，对平板的菌落数进 行统计，结果如下： 稀释度/倍 104 105 106 平板 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平板菌落数 /个 432 421 445 78 67 74 9 6 8 为了保证结果准确，应选择上述稀释________倍的平板菌落数作为统 计结果，计算出每毫升样品中目的菌菌株数为________个。 (6)测定微生物的数量常采用____________法，其统计的数值往往比 实 际 数 目 低 ， 原 因 是 __________________________________________________________ ______________ __________________________________________________________ ______________。 答案 (1)目的菌 选择 (2)化合物 A 需氧 (3)减少 增加 (4)平板划线法 接种环 灼烧灭菌 (5)105 7.3×107 (6)稀释涂布平板 两个或多个细胞连在一起时，观察到的只是一个 菌落 解析 (1)培养基中加入化合物 A 的目的是筛选目的菌，这种培养基 属于选择培养基。(2)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中 的化合物 A，因为除了化合物 A，培养基的成分中没有其他的氮源和 碳源。实验需要振荡培养，振荡可以增大培养液中的溶氧量，由此推 测目的菌的代谢类型是异养需氧型。(3)培养若干天后，应选择培养 瓶中化合物 A 含量减少的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目 的菌的数量增大。(4)接种用到的方法一般有平板划线法和稀释涂布 平板法，前一种方法的接种工具是接种环，这种工具在操作时采用的 灭菌方法为灼烧灭菌。(5)应选取菌落数在 30～300 之间的平板进行 计数，所以稀释 105 倍的平板符合要求，则每毫升样品中目的菌菌株 数为(78＋67＋74)÷3÷0.1×105＝7.3×107 个。(6)利用稀释涂布平 板法计算的活菌数比实际值偏小，因为可能有两个或多个细胞形成一 个菌落。 15.蛋白酶在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值。 某同学为筛选产蛋白酶的高产菌株，做了如下实验步骤(配制了下列 培养基，在适宜条件下培养)： 步骤 取样 培养基 培养结 果 Ⅰ 土壤 样品 葡萄糖、(NH4)2SO4、K2HPO4·3H2O、KH2PO4、 NaCl、CaCl2、MgSO4·7H2O，加水定容 培养液a Ⅱ 1 mL 同上 菌落 培养液 a Ⅲ 挑取 单菌落 细菌培养基 培养液b (1)为实现筛选目的，步骤Ⅰ所使用的培养基配方中，应去除________ 并加入高浓度的________。 (2)为实现目的菌的分离和计数，步骤Ⅱ所使用的培养基中还应加入 ________制成平板，采用的接种方法是______________，实验结果如 图 A。 (3)步骤Ⅲ应挑取图 A 中________处的菌落，本步骤的目的是 __________________________________________________________ ______________。 (4)图 B 是该蛋白酶和其他酶的热稳定性数据，即酶在不同温度下保 温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性。在该蛋白酶 的工业化生产过程中，通常需对发酵液在 60～70 ℃条件下保温一定 时 间 ， 其 作 用 是 __________________________________________________________ ______________。 答案 (1)葡萄糖 蛋白质 (2)琼脂 稀释涂布平板法 (3)a 快速增加目的菌的种群数量(扩大培养) (4)大幅度降低发酵液中其他酶的活性 解析 (1)培养基中添加特定的成分以促进目标微生物生长而抑制其 他微生物生长，用于进行微生物筛选。由题意可知，为筛选产蛋白酶 的高产菌株，步骤Ⅰ所使用的培养基配方中，应去除葡萄糖并加入高 浓度的蛋白质。(2)为实现目的菌的分离和计数，步骤Ⅱ所使用的培 养基中还应加入琼脂(凝固剂)制成平板，采用的接种方法为稀释涂布 平板法。(3)图 A 中 a 处的菌落透明圈最大，故其菌种分解蛋白质的 能力最强，所以步骤Ⅲ应挑取图 A 中 a 处的菌落，本步骤的目的是快 速增加目的菌的种群数量(即扩大培养)。(4)图 B 曲线表明，60～ 70 ℃条件下，蛋白酶的活性维持在较高水平，而此时其他酶的活性 很低，因此在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需将发酵液在 60 ～70 ℃条件下保温一定时间，可大幅度降低发酵液中其他酶的活性。