60 coγ射线辐照神经移植后骨骼肌神经末梢和运动终板再生观察

60 coγ射线辐照神经移植后骨骼肌神经末梢和运动终板再生观察

　　60Coγ射线辐照神经移植后骨骼肌神经末梢和运动终板再生观察　　摘要:目的探讨变性神经移植后骨骼肌神经末稍和运动终板的再生情况.方法将60Co先期辐射处理后的兔自体神经原位再植.术后4，6和8mo取术侧腓肠肌，乙酰胆碱脂酶（AchE）组化法显示神经终末及运动终板.光镜检查并用图像分析仪测间接反映终板成熟程度的灰度值.结果实验组术后4mo时的AchE阳性反应呈棕红色或棕褐色，分布稀疏离散、不规则.AchE结合镀银切片上，AchE阳性部位示较明显的棕黑色沉淀，存在单根神经末稍支配单个运动终板，但数目极少.术后6，8mo的AchE阳性反应是棕红色或棕灰色沉淀，分布较规则.结合镀银的切片上神经末稍与运动终板相连较多，单根神经末稍支配一个运动终板后，偶有再次分支支配另一个运动终板.术后8mo，AchE与正常对照未见统计学差异（P>0.05）而术后4和6mo，与正常肌组织中的AchE比较，仍有显著性差异（P<0.01）.结论长段自体神经（约3cm）经60Co先期处理后再植，去神经支配骨骼肌可恢复再支配.　　Keyirradiation;exsomatizednerve;interpositionalreplantation;skeletalmuscle;mo-torendplate;acetylcholinesterase（AchE）Abstract:AIMToevaluateregenerationchangesofnerve-endingsandmotorendplatesofskeletalmusclesafternervedegeneration\ntransplantation.METHODSNervesegmentof30mminlengthinsciaticnerveexcisedfromtheadulthealthrabbit（Chinesebig-earrabbit）andirradiatedbeforebeingreplantedinterpositionally.Thespec-imentsofthegastroemiusmusclestheoper-atedlimboftheanimalat4，6and8monthsaftergraftingre-spectivelyandstainedethodofAchEhistochem-istryforrevealingnerve-endingsandmotorendplates.RE┐SULTSBroonthsonths.AchE-conbinedonths.Meanotorendplatecanbeseenandnerveendinginnervatingonemotorendplateotorendplatecanbeseenocca-sionally，too.CONCLUSIONReinner-vationcanbeob-tainedfolloirradiation.　　0引言　　四肢巨大肿瘤保肢术后造成的获得性关键神经的牺牲，往往涉及功能重建和神经移植.尤其对长段主要神经干的缺损，仍是临床上处理较棘手的问题［1］.因此，周围神经再生便成为临床上亟待解决的重要课题;同时也是神经生物学领域中研究的热点［1-3，5-7］.因此研究变性神经移植后运动终板与神经末稍的变化很有必要.　　1材料和方法　　1.1材料采用健康中国家兔30只，雌雄不限，体质量2.0～2.2kg，随机分为2组.实验组18只，对照组12只.实验动物用戊巴比妥钠（30mg・kg-1）腹腔麻醉下取右大腿后部正中切口，显露梨状肌下缘至胫腓分叉处的坐骨神经段，切取30mm长坐骨神经，无菌状态下经350Gy60Co辐照9min30s以成无活性组织.用9～0无创缝线镜下原位断端外膜缝合.对照组切取后不经60\nCo照射直接原位外膜缝合.术后单笼饲养，定期观察、取材.所有离体神经切断、再植历时约2h后原位缝合.照射距离为35cm，剂量率为3411.68伦琴，剂量吸收率为350Gy.　　1.2方法①检测时间:分别于术后4，6和8mo取材做组织学检查.②组织学检查为运动终板及神经末稍组化染色:术后4，6和8mo左右手术侧腓肠肌中部取材，硫化胆碱-亚铁氰化铜反应显示胆碱酯酶.观察肌组织中AchE阳性反应沉淀.Gros-Bielshoo的腓肠肌切片上，AchE阳性反应呈棕红色或棕褐色，分布稀疏离散，不规则（Fig1）MEP形态不规则，有的凝聚，有的崩解扩散呈“亚铃”状，亦有呈棒状或不规则状.着色较浅，银复染已不能显示神经末稍.术后6mo，腓肠肌切片AchE染色渐加深，AchE重新聚积，形态尚规则（Fig2）AchE结合镀银的切片上，AchE阳性部位显示为较为明显的棕黑色沉淀，呈圆形或椭圆形，存在单根神经末稍支配单个MEP（Fig3）.术后8moAchE染色呈棕褐色或棕黑色，大多数呈圆形或椭圆形，较规则地排列在腓肠肌的中上边缘部，形态与色泽接近正常，且较丰富（Fig4）.银复染后可见肌纤维间隙中有丰富的再生神经纤维末稍，呈“爪”状分布，神经纤维沿肌纤维表面行走一段距离后进入终板（Fig5）.偶有神经末稍再次分支支配另一个MEP.　　图1－图5略　　2.2对照组对照组4，6和8mo的结果同实验组6，8mo情形相似.2.3计算机图像分析处理\n术后4，6和8mo，实验组术侧腓肠肌胆碱脂酶组化染色图像分析灰度值结果:4，6mo时与正常对照组存在显著性差异（P<0.01），而8mo时与正常对照组无统计学差异（P>0.05，Tab1）.　表1腓肠肌胆碱酯酶灰度值结果　略　　3讨论　　再生运动神经的功能恢复最后要靠运动终板（motorendplate，MEP）的再生与重建，终板的功能状态能反映出肌肉的功能.Ranish认为周围神经离断后2oAchE染色深浅.术后4moAchE着色淡，6，8mo以后色泽加深，并接近正常.统计结果提示各时间段存在显著性差异.我们的研究表明:①随着再生神经的不断生长，AchE活性不断增强;②60Co照射组，新鲜离断植入组去神经支配骨骼肌重新得到再生神经纤维支配.张毅等［4］认为，在严格控制组化染色条件下，微机图像分析测试系统可以准确，迅速地对关节软骨不同层次的修复中的变化规律.他们对组化染色切片进行灰度值测定.结果判定:淡染→灰度值↑→含量低;浓度→灰度值↓→含量高.我们采用图像分析技术对术侧腓肠肌切片AchE进行定量灰度值分析，目的是确定或检测神经修复不同时间段，再生轴突到达终末器官的数目，以及成熟的程度，用灰度值来间接反映再生神经纤维的情况.　　金冶华等［5］证实小剂量X线照射有效地抑制少突胶质生成和形成髓鞘，从而促进了神经元轴突的再生长.王新园等［6］报导经辐照等先期处理后，当Schperaturesandperiods［J］.ZhonghuaShouothyRC，RobbertDI，MarcoL，PierluigiT，EralRO.Long-termassessmentofnerverepairicroporouspolytetrafluoroethylenechamber［J］.Di-siJunyiDaxueXuebao（JFourthMilMed\nUniv），1999;20（12）:1097-1100.［3］MaJZ，LuoYX，，DingH.ThestudyonNGFeffectondegeneratedandreinnervatedmotorend-platehistochemicalandultrastructuralchanges［J］.ZhuonghuaXianageanalysisofpro-teoglycaninarticularcartilage［J］.Di-siJunyiDaxueXuebao（JFourthMilMedUniv），1999;20（12）:S126-S128.［5］JinYH，ZhangSB，ilMedUniv），1999;20（12）:S112-S115.