紫外分光光度法检验标准操作规程

紫外分光光度法检验标准操作规程

目的：建立紫外分光度法检验标准操作规程 范围：用于成品、原辅料鉴别、检查和含量测定 1．仪器：紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显 示系统和数据处理系统等部分组成。 为了满足紫外可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘 钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区 2．检定 2.1 波长准确定 2.1.1 波长准确度的允差范围：双光束光栅型紫外一可见分光光度计波长准确度 允许误差为±0.5mm。单元束棱镜型 350mm 处±0.7nm，500nm 处±2.0nm， 700nm±4.8nm 2.2 吸收度准确度：精密称取在 120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约 60mg，置 1000ml 量瓶中，用硫酸液（0.005mol/l）为空白，在 235、257、313、350nm 分 别测定吸收度，然后换算成 E1%1cm，测得值应符合下表中规定的允差范围（± 1%），国际药典规定的允差亦为±1%。 分光光度法允差范围 波长（nm） 吸收强度 吸收系数（E1%/1cm） 允差范围 235 最小 124.5 123.3－125.7 257 最大 144.0 142.6－145.4 313 最小 48.62 48.3－49.11 文 件 紫外分光光度法检验标准操作规 程 编 号 SOP•09•1008 版 本 2 页码 1/4 编 制 日 期 替 代 ∕ 审 定 日 期 颁 发 质量保障部 批 准 日 期 生 效 年 1 月 20 日 发 放 质保中心 350 最大 106.6 105.5－107.7 分辨率、杂散光、基线平直度、稳定度、绝缘电阻等项检定，按中华人民共和 国国家计量检定规程 JJ6682～90(双光束紫外可见分光光度计检定规程)执行， 并应符合有关项下的规定。日常常规测定主要是对以上两项时常检查。 3．样品测定操作法 3.1 吸收系数测定(性状项下)按各该品种项下规定的方法配制供试品溶液，在 规定的波长(参见4.8项)测定其吸收度，并计算吸收系数，应符合规定的范围。 3,2鉴别及检查：按各该品种项下的规定，测定供试品溶液在有关波长处的最 小及最大吸收，有的并须测定其各最大吸收峰值或最大吸收与最小吸收的比值， 均应符合规定。 3.3 含量测定 3.3.1 对照品比较法：按各该品种项下规定的方法，分别配制供试品溶液 和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成份的量应为供试品溶液中被测成分标示 量的(100±10)%以内，用同一溶剂，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶 液的吸收度。 3.3.2 吸收系数法：按各该品种项下配制供试品溶液，在规定的波长及波 长±1nm处测定其吸收度，按各该品种在规定条件下给出的吸收系数计算含量。 采用吸收系数法应对仪器进行校正后测定，如为测定新品种的吸收系数， 需按“吸收系数测定法”的规定进行。 4．注意事项 4.1 试验中所用的量瓶、移液管均应检定校正，洗净后使用。 4.2 使用的石英吸收池必须洁净。用于盛装样品，参比及空白溶液的吸收池， 当装入同一溶剂时，在规定测定吸收池的透光率，如透光率相差在O.3%以下者可 配对使用，否则必须加以校正。 4.3取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装盛样品溶液以池体积的4/5为度， 使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留 溶剂，为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用醮有空白溶剂擦镜纸 擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放入样品室时应注意每次放入的方向相同。 使用后用溶剂及水洗干净，晾干防尘保存，吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发 烟硝酸(3：1L/L)混合液稍加浸泡后，洗净 备用。如用铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸 钾吸附于吸收池表面。 4.4 测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求， 可用lcm石英吸收池盛溶剂以空气为空白(即参比光路中不放置任何物质)测定其 吸收度，应符合下表规定。 以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸收度的规定 波长范围(nm) 220～240 241—250 25l一300 300以上 吸收度 <0.4 <0.2 <0.1 <0.05 每次测定时应用同一厂牌批号，混合均匀的 1 批溶剂。 4.5 称量应按药典规定要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀 释时所取容积一般应不少于 5ml。含量测定供试品应称取 2 份，如为对照品比照 法。对照品一股也应称取 2 份。吸收系数检查也应称取供试品 2 份，平行操作， 每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。作鉴别或或检查可取样品 1 份。 4.6 供试品测试溶液浓度，除各该品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸收 度以在 0.3-0.7 之间为宜，吸收度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸 收度线性范围，配制合适的读烽浓度。 4.7 选用仪器的狭缝谱宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测的吸收度值 会偏低，狭缝宽度的选择应以减小狭缝宽度时供试品吸收度一再增加为准，对于 中国药典紫外测定的大部分品种，可以使用 2nm 缝宽，但对某些品种如表青霉 素钾及钠的吸收度检查则需用 1nm 缝宽或更窄，否则其 264nm 的吸收度会偏低。 4.8 测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm 外，再测几点吸度，以 核对供品的 吸收峰位置是否正确，并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规定 外吸收度最大波长应该品种项下规定的波长±1nm 以内，否则应考虑试样 的同一性，纯度以及傖仪器波长的准确度。 5． 结果计算 5.1 对照品比较法：或根据供试品溶液及对照品溶液的吸收度怀对照品溶液的 浓度以正 比法算出供试品溶液的浓度，再计算含量 A 样品：A 对照=C 样品：C 对照 C 样品=A 样品×C 对照/A 对照 式中：A 为吸收度值；C 为测试液浓度(以 mg/ml 计) 5.2 吸收系数法：中国药典规定的吸收系数，系指 E1%/lcm，即在指定波长时， 光路长度为 lcm，试样浓度换算为 1%(g/mL)时的吸收度值，故应先求出被测样品的 F1%/lcm 值，再与规定的 E1%/1cm 值比较，可计算出供试品的含量。 A E1/1cm(样品)＝————— C×L 式中：A 为供试品溶液测得的吸收度值；C 为供试品 溶液的百分浓度，即 lOOml 中含溶质的克数 (g/m1)：L 为吸收池的光距长度(cm) E1%/lcm(样品) E1%/1cm(标准) ×100 E1%/lcm(样品)为根据前式计算出的供试品的百分吸收系数； E1%/lcm(标准)为药典或药品标准中规定的百分吸收系数。