植物保护农药-中国农学通报

植物保护农药-中国农学通报

中国农学通报2016,32(20):40-43ChineseAgriculturalScienceBulletin4种杀菌剂对葡萄灰霉病菌的毒力测定及复配试验王丽，周增强，侯珲（中国农业科学院郑州果树研究所，郑州450009）摘要：为了筛选出能有效防治葡萄灰霉病的药剂，为葡萄灰霉病的防治和复配制剂的研究奠定理论基础。采用菌丝生长速率法，测定了吡唑醚菌酯、咯菌腈、嘧菌环胺和啶酰菌胺4种杀菌剂对葡萄灰霉病菌的毒力，并研究吡唑醚菌酯和咯菌腈的复配效果。毒力测定结果表明：4种杀菌剂对葡萄灰霉病菌都有较强的抑制作用，咯菌腈的毒力最强，EC50值为0.0845mg/L；吡唑醚菌酯和嘧菌环胺的抑制作用次之，EC50值分别为3.6023、5.6300mg/L；啶酰菌胺的抑制作用最低，EC50值为68.2860mg/L。联合毒力测定和评价结果表明：吡唑醚菌酯和咯菌腈5种混配组合对葡萄灰霉病菌的EC50分别为0.3483、0.5291、0.5741、1.8751、3.9185mg/L，共毒系数(CTC)分别是397.50、166.64、28.75、4.85、2.24。配比为1:25时增效作用最明显，共毒系数(CTC)为397.50。关键词：杀菌剂；葡萄灰霉病；毒力测定；联合毒力中图分类号：S432.4文献标志码：A论文编号：casb16010045ToxicityDeterminationandSynergisticEffectofFourFungicidesAgainstGrapeBotrytiscinereaWangLi,ZhouZengqiang,HouHui(ZhengzhouFruitResearchInstitute,CAAS,Zhengzhou450009)Abstract:InordertoscreenouteffectivefungicidesagainstgrapeBotrytiscinerea,andlayabasisforgrapeBotrytiscinereapreventionandcompoundedpreparation,thetoxicitiesoffungicideslikepyraclostrobin,fludioxonil,cyprodinilandboscalidagainstgrapeBotrytiscinereaweretestedbymyceliumgrowthratemethod,andthesynergisticeffectofpyraclostrobinandfludioxonilwasstudied.Theresultsofthetoxicitydeterminationshowedthatthe4fungicideshadinhibitingeffectongrapeBotrytiscinerea,fludioxonilhadthebesttoxicitywithEC50valueof0.0845mg/L,thenwerepyraclostrobinandcyprodinilwithEC50valuesof3.6023and5.6300mg/L,respectively.BoscalidhadthelowestinhibitingeffectwithEC50valueof68.2860mg/L.TheresultofthealliedtoxicitydeterminationshowedthatEC50valuesof5compoundedpreparationsofpyraclostrobinandfludioxonilwere0.3483,0.5291,0.5741,1.8751and3.9185mg/L,andthevaluesofco-toxicitycoefficientwere397.50,166.64,28.75,4.85and2.24,respectively.Theadditioneffectwasmostobviouswhenthemassratioofpyraclostrobinandfludioxonilwas1:25,andthevalueofco-toxicitycoefficientwas397.50.Keywords:fungicides;grapeBotrytiscinerea;toxicitydetermination;alliedtoxicity0引言设施葡萄的种植面积也正在快速增加。由灰霉病菌随着人们生活水平的提高，对葡萄的需求量增加，(Botrytiscinerea)引起的灰霉病是葡萄生产上危害较基金项目：陕西省科技统筹创新工程地方重大专项“葡萄主要病虫害绿色防控技术研究与示范”(2006BAD07B02)。第一作者简介：王丽，女，1981年出生，河南正阳人，助理研究员，主要从事果树病害研究。通信地址：450009河南省郑州市未来路南首郑州果树所，Tel：0371-65330953，E-mail：wanlgi06@caas.cn。通讯作者：周增强，男，1961年出生，陕西眉县人，副研究员，主要从事果树病害防控技术研究。通信地址：450009河南省郑州市未来路南首郑州果树所，Tel：0371-65330953，E-mail：zqzhouhnzz@163.com。收稿日期：2016-01-11，修回日期：2016-03-14。\n王丽等：4种杀菌剂对葡萄灰霉病菌的毒力测定及复配试验·41·大的病害之一，在中国设施葡萄的生产中发生较为严纯化和鉴定后获得菌株。菌株4℃下保存备用。重，已成为目前限制中国设施葡萄产业发展的重要病1.2供试药剂[1-2]害。灰霉病菌具有寄主多样性、侵染模式多样化、可98%咯菌腈原药、98%嘧菌环胺原药由河南广农农药以利用菌丝、分生孢子或菌核在病残体中存活等特点，厂提供；96%吡唑醚菌酯原药由江苏剑牌农药化工有限这些特点给灰霉病的防治带来困难，很难通过单一有公司提供；96%啶酰菌胺原药由河北美星有限公司提供。[3]效的方法使该病得以控制。目前葡萄灰霉病的防治1.3毒力测定[4-5][17]仍是以化学防治为主，生态防治和生物防治为辅。1.3.1单剂室内毒力测定采用菌丝生长速率抑制法化学药剂防治见效快，但由于长期不合理使用，不但对测定。根据预试验结果，选择各药剂适当的浓度。无生态环境造成污染。而且病原菌也易产生抗药性，使菌操作条件下，将配制好的供试药剂母液按照设定的[6]防治效果降低。浓度比例加入到已融化好的PSA培养基中，充分混匀目前国内外报道灰霉病菌对多菌灵、腐霉利、异菌后倒入直径为9cm的培养皿中，制成含系列浓度药剂脲和嘧霉胺等常用的化学杀菌剂已经普遍产生不同程的PSA平板（以不加药剂处理为对照）。待培养基完[7-9]度的抗药性。为了解决病原菌的抗药性、环境污染全凝固后，将培养好的病原菌用打孔器打成菌饼（直径和果品残留超标等一系列问题，迫切需要加强新型杀5mm），自菌落边缘挑起菌饼，分别转接到不同处理浓菌剂和利用现有杀菌剂筛选具有增效作用组合的研度的培养基上，每处理4皿，重复3次。放入人工气候究。吡唑醚菌酯是当前活性较高的QoIs类杀菌剂之箱，在28℃下培养。一，但病原真菌对该类药剂产生抗药性的突变频率较根据对照皿中菌丝的生长情况，待对照长满皿时[10]高，高选择压下在自然界中易形成抗药性群体。近调查菌丝的生长情况，数显游标卡尺十字交叉测量各年来被广泛应用在多种植物的病害防治上。苯基吡咯处理的菌落扩展直径，按公式(1)计算抑菌率。[11]类的杀菌剂咯菌腈对灰霉病有良好的防治效果。对照菌落直径-处理菌落直径抑菌率=×100%[12]对照菌落直径George等研究了灰葡萄孢菌株对咯菌腈的敏感性，未发现对咯菌腈敏感性下降的菌株；Zhao等[13]研究了………………………………………………………(1)咯菌腈对苹果灰霉病菌的毒力，EC50的平均值是1.3.2杀菌剂混配效果测定根据单剂毒力测定结果，0.005mg/L，对梨灰霉病菌的EC50平均值也是对2种毒力较高的药剂吡唑醚菌酯和咯菌腈进行混0.005mg/L。嘧菌环胺是新一代嘧啶胺类杀菌剂，毒配，有效成分配比为：25:1、12.5:1、1:1、1:12.5、1:25，每性低，对作物灰霉病等有特效，主要作用机制为抑制真个配比配制成相应7个浓度梯度。采用生长速率法对菌的蛋氨酸生物合成和水解酶分泌，同现有咪唑类、吗葡萄灰霉病菌进行联合毒力测定。计算混配剂对菌丝啉类、三唑类、苯基吡咯类、二羧酸亚胺类杀菌剂都无生长抑菌率，分别求得药剂不同混配比例的毒力回归[18]交互抗性，对敏感或抗性的病原菌也有良好的活方程、EC50和相关系数。根据Sun法(1960)计算混合[14-15]药剂实际毒力指数(ATI)、混合药剂的理论毒力指数性。啶酰菌胺是德国巴斯夫公司开发的琥珀酸脱氢酶抑制剂，作用与病原菌细胞内的线粒体，与呼吸链(TTI)和共毒系数(CTC)。计算公式如(2)~(4)所示。电子传递体系中复合体Ⅱ结合，阻碍呼吸能量代谢，抑标准药剂EC50混合药剂实际毒力指数(ATI)=×100[16]混合药剂EC制ATP的合成，导致病原菌死亡。50有关这4种杀菌剂对葡萄灰霉病菌毒力的研究报………………………………………………………(2)道较少，吡唑醚菌酯和咯菌腈对葡萄灰霉病菌的联合混合药剂的理论毒力指数(TTI)=A药剂毒力指毒力的研究则未见报道。笔者选用不同类型杀菌剂对数×A占混合组配中的百分比+B药剂毒力指数×B占葡萄灰霉病菌进行室内毒力测定，并研究了2种杀菌混合组配中的百分比………………………………(3)剂联合毒力，旨在找出防治葡萄灰霉病的有效药剂和混合药剂实际毒力指数(ATI)共毒系数(CTC)=×100明确不同比例混配的联合作用类型，为混剂的应用和混合药剂理论毒力指数(TTI)该病害的有效防治提供理论参考。………………………………………………………(4)1材料和方法式中A、B分别为吡唑醚菌酯和咯菌腈单剂，以1.1供试菌种CTC值判断不同比例混剂的联合毒力作用，80＜葡萄灰霉病菌(Botrytiscinerea)，从河南省郑州市CTC＜100为相加作用，CTC≤80时为拮抗作用，葡萄灰霉病发病重的果园采集植物样本，经组织分离、CTC≥120时为增效作用。\n·42·中国农学通报http://www.casb.org.cn1.4数据处理与统计分析0.0845mg/L；吡唑醚菌酯对葡萄灰霉病菌也有很好的采用DPS统计软件和Excel软件对测定数据进行抑制作用，EC50值为3.6023mg/L；再其次为嘧菌环胺，处理和计算，得到毒力回归方程、EC50及相关系数等，其EC50值为5.6300mg/L。啶酰菌胺对葡萄灰霉病菌比较不同杀菌剂对葡萄灰霉病菌的抑制作用。的抑制作用较差，EC50值为68.2860mg/L。因此，选用2结果与分析吡唑醚菌酯和咯菌腈进行下一步复配研究。2.1供试杀菌剂对葡萄灰霉病菌的室内毒力测定2.2吡唑醚菌酯和咯菌腈对葡萄灰霉病菌的混配效果4种杀菌剂对葡萄灰霉病病原菌的毒力测定结果由表2可以看出，不同配比的吡唑醚菌酯和咯菌见表1。咯菌腈的抑制作用最强，其EC50值为腈混剂均对葡萄灰霉病菌有抑菌效果，但不同配比对表1杀菌剂对葡萄灰霉病菌的毒力药剂毒力回归方程相关系数(r)EC50/(mg/L)吡唑醚菌酯y=4.4967+0.90426x0.93303.6023咯菌腈y=6.0679+0.9949x0.97610.0845啶酰菌胺y=4.1250+0.4770x0.986968.2860嘧菌环胺y=4.0366+1.2837x0.96935.6300表2吡唑醚菌酯与咯菌腈复配对葡萄灰霉病菌的毒力配比(吡唑醚菌酯:咯菌腈)毒力回归方程相关系数(r)EC50/(mg/L)TTIATICTC1:0y=4.4967+0.9043x0.93303.60231000:1y=6.0679+0.9949x0.97610.08454265.68551:25y=5.6607+1.4423x0.98000.34831034.3679260.2187397.501:12.5y=5.3879+1.4031x0.88740.5291680.8206408.5693166.641:1y=5.2796+1.1601x0.96150.5741627.52862182.842828.7512.5:1y=4.8280+0.6301x0.98411.8751192.11503957.11624.8525:1y=3.7269+2.1465x0.85853.918591.93374105.46682.24[20]菌丝的抑制率不同。CTC最高的为吡唑醚菌酯和咯菌同。李红阳等测定啶酰菌胺对葡萄灰霉病有良好的腈配比为1:25的处理，其值为397.50，EC50值为田间防治效果，本试验有待于对该杀菌剂做进一步的0.3483mg/L；其次为吡唑醚菌酯和咯菌腈配比为1:12.5田间药效试验。吡唑醚菌酯属于甲氧基丙烯酸酯类杀的处理，其CTC值为166.64，EC50值为0.5291mg/L；吡菌剂，咯菌腈属于苯基吡咯类杀菌剂。2种杀菌剂作用唑醚菌酯和咯菌腈配比为1:1、12.5:1、25:1处理的CTC机制不同，对灰霉病菌的抑制效果较好，且目前没有对值分别为28.75、4.85、2.24，EC50值分别为0.5741、吡唑醚菌酯和咯菌腈复配产生交互抗性的报道，因此1.8751、3.9185mg/L。以吡唑醚菌酯和咯菌腈配比为选取吡唑醚菌酯和咯菌腈为复配筛选药剂。1:25增效作用最好，其次是1:12.5的配比。由吡唑醚菌酯和咯菌腈复配试验的结果可知，各3结论与讨论比例混配对葡萄灰霉病菌均有抑菌作用，以1:25配比本试验单剂毒力测定结果显示，吡唑醚菌酯和咯的抑菌效果最好，共毒系数是397.50。与2种单剂相菌腈的抑制菌丝生长的作用最强，其EC50值分别为比，该复配剂能扩大杀菌谱和应用范围、避免单一用药3.6023、0.0845mg/L；其次为嘧菌环胺，其EC50值为容易产生抗药性等问题。进一步试验需要研究该混剂5.6300mg/L；啶酰菌胺对葡萄灰霉病菌的抑制作用较的田间实际应用效果。差，EC50值为68.2860mg/L。嘧菌环胺的EC50与沈迎此外，为避免或延缓葡萄灰霉病菌抗药性的产生，[19]春测定的嘧菌环胺的EC50值(0.0319mg/L)有一定差用药时应以预防和初期防治为主。应注意生物药剂和别，可能是因为选用菌株不同其敏感性或抗药性不化学药剂的交替使用，保护性杀菌剂与治疗性杀菌剂\n王丽等：4种杀菌剂对葡萄灰霉病菌的毒力测定及复配试验·43·等进行复配或者交叉使用，在同一个生产季同一种单[11]杨玉柱,焦必宁.新型杀菌剂咯菌腈研究进展[J].现代农药,2007,6剂的使用次数不超过2次[21]。(5):35-39.[12]GeorgeAB,ThomasV,OlgaK,etal.MultipleresistanceofBotrytiscinereafromkiwifruittoSDHIs,QoIsandfungicidesof参考文献otherchemicalgroups[J].PestManagementScience,2010,66(9):967-[1]张鹏.葡萄灰霉病发生规律及防治技术研究[D].北京:中国农业科973.学院,2011.[13]ZhaoH,KimYK,HuangL,etal.Resistancetothiaben-dazoleand[2]李令军.葡萄灰霉病防治技术[J].河北果树,2014(1):50-50.baselinesensitivitytofludioxonilandpyrimethanilinBotrytis[3]WilliamsonB,TudzynskiB,TudzynskiP,etal.Botrytiscinerea:thecinereapopulationsfromappleandpearinWashing-tonState[J].causeofgreymoulddisease[J].MolecularPlantPathology,2007,8PostharvestBiologyandTechnology,2010,56(1):12-18.(5):561-580.[14]范文玉,马韵升.嘧菌环胺[J].精细与专用化学品,2005,13(11):13-[4]陈宇飞,文景芝,李立军.葡萄灰霉病研究进展[J].东北农业大学学14.报,2006,37(5):693-699.[15]柴宝山,刘长令,李志念.嘧菌环胺的合成与杀菌活性[J].农药,2007,[5]张玮,乔广行,黄金宝,等.中国葡萄灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性检46(6):377-378.测[J].中国农业科学,2013,46(6):1208-1212.[16]亦冰.新颖杀菌剂——啶酰菌胺[J].世界农药,2006,28(5):51-53.[6]石明旺,孙永叶,贺荣国,等.杀菌剂及其复配对番茄灰霉病菌的毒[17]农业部农药检定所.NY/T1156.2—2006农药室内生物测定试验力测定[J].河南科技学院学报,2007,35(3):54-56.准则杀菌剂第2部分:抑制病原真菌菌丝生长试验平皿法[S].北[7]丁中,刘峰,王会利,等.番茄灰霉菌的多重抗药性研究[J].山东农业京:中国农业出版社,2006:1-2.大学学报,2001,32(4):452-456.[18]农业部农药检定所.NY/T1156.6—2006农药室内生物测定试验[8]LatorreBA,SpadaroI,RiojaME.Occurrenceofresistantstrains准则杀菌剂第6部分:混配的联合作用测定[S].北京:中国农业出ofBotrytiscinereatoanilinopyrimidinefungicidesintablegrapes版社,2006:1-2.inChile[J].CropProtection,2002,21(10):957-961.[19]沈迎春.嘧菌环胺对葡萄灰霉病室内毒力测定和田间药效试验[J].[9]MyresiotisCK,KaraoglanidisGS,TzavellaKK.Resistanceof农药,2010,49(4):306-307.Botrytiscinereaisolatesfromvegetablecropstoanilinopyri-[20]李红阳,花金顺,周加春,等.50%啶酰菌胺水分散粒剂防治葡萄灰midine,phenylpyrrole,hydroxyanilide,benzimidazole,anddi-霉病田间药效试验[J].现代农业科技,2015(19):132-133.carboximidefungicides[J].PlantDisease,2007,91(4):407-413.[21]李红阳,陈志谊,周步海,等.设施葡萄病虫害防治规程[J].江苏农业[10]贾俊超,马琳,范志金,等.病原菌对Strobilurin类杀菌剂抗药性机科学,2013,41(2):129-130.理的研究进展[J].农药学学报,2008,10(1):1-9.