生物学常用试剂配制

生物学常用试剂配制

常用试剂储存注意事项：储存于阴凉、通风的地方；远离火种、热源。避免光照。室温不超过30℃，相对湿度不超过80％。包装必须密封，切勿受潮。应与易（可）燃物、还原剂、碱类、醇类、食用化学品分开存放，切忌混储，储区应备有合适的材料收容泄漏物。操作注意事项：尽量在通风橱操作，加强通风，避免粉尘扩散。远离易燃、可燃物，避免与还原剂、碱类、醇类接触，防止包装及容器损坏。0.5MEDTA（PH8.0）组分浓度:0.5mol/LEDTA（MW：372.24）配制量:500ml配制方法:1．称取93gNa2EDTA·2H2O置于500ml蓝盖瓶中。2．加入400ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。3．用NaOH调节调节pH值至8.0（约需加入20g固体NaOH），当pH接近8.0时，EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。4．高温高压灭菌后，室温保存半年。5MNaCl组份浓度：5mol/LNaCl(MW：58.5)配制量：1L配制方法：1.准确称取氯化钠292.5g，置于1L的蓝盖瓶中。2.用去离子水溶解并稀释至1L。3.高温高压灭菌后，常温保存。2.5MCaCl2组份浓度：2.5mol/LCaCl2(MW：110.98)配制量：50ml配制方法:1.准确称取氯化钙g于50ml的conicaltube中。2.用去离子水溶解并稀释至500ml，用0.22μm滤膜过滤除菌滤膜过滤除菌到进口的conicaltube。3.贮存于4℃。50%甘油组分浓度：50%(V/V)glycerol配制量：100ml配制方法:1.量取下列试剂，置于250ml蓝盖瓶中：100%glycerol50ml2.加入50ml去离子水，充分搅拌溶解。3.高温高压灭菌，4℃保存。4.使用时，到超净台分装。\nAmp-氨苄青霉素（钠盐）放置：置于4°C冰箱配方及配法：配成200mg/ml的1000*溶液储存(40g溶于200ml蒸馏水中)，溶解后在超净台用注射器过滤灭菌分装，置于-20°C冰箱第二层，以1*的终浓度（200ug/ml）加入培养基。Kan-卡那霉素（硫酸根）放置：置于试剂柜配方及配法：配成20mg/ml的1000*溶液储存(4g溶于200ml蒸馏水中)，溶解后在超净台用注射器过滤灭菌分装，置于-20°C冰箱第二层，以1*的终浓度（20ug/ml）加入培养基。DTT（二硫苏糖醇）放置：置于-20°C冰箱顶层配方及配法：1MDTT的配制：溶解7.7gIPTG于50mL水中，溶解后分装成1。5ml管，置于-20°C冰箱第二层使用浓度为1-10MmPMSF（苯甲基磺酰氟）放置：试剂柜0.1MPMSF的配制：分子量174.19保存室温保存，配成PMSF溶液后需-20℃保存。配制溶解0.87g的PMSF于足量的异丙醇中，定容到50ml。分成小份贮存于―20℃。工作浓度1mM注意：有毒，对呼吸道粘膜、眼睛和皮肤有很强的危害性，配制时请在通风橱进行，并穿实验服及戴一次性手套。10×TEBuffer（pH8.0）组份浓度:100mMTris-HCl，10mMEDTA配制量:1L配置方法1.量取下列溶液，置于1L蓝盖瓶中。1.0MTris-HClBuffer（pH8.0）100mL0.5MEDTA（pH8.0）20mL2.向蓝盖瓶中加入约800mL的去离子水，均匀混合。3.将溶液定容至1L，高温高压灭菌。4.室温保存半年。注意：此为贮存液，使用时稀释100倍，用于PCR纯化和质粒提取后产物保存。0.5MPIPES（PH6.7）配制量：10ml（MW:302.4）配制方法：1.称取1.5g，加入到15ml塑料离心管内。2.加8ml的水，搅拌溶解。3.用5MKOH调PH至6.74.0.22um滤膜过滤，-20℃保存。\n1.5MTris-HCl（pH8.8）组份浓度:1.5mol/LTris-HCl配制量:1L配制方法:1.称取181.7g的Tris-base（MW：121.14）置于1L蓝盖瓶中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调pH值至8.8。4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存半年。1.0MTris-HCl（pH8.0）组分浓度:1.0mol/LTris-HCL配制量:1L配制方法:1.称取121g的Tris-base（MW：121.14）于1L蓝盖瓶中，2.加入900ml的去离子水，充分搅拌均匀，3.用浓盐酸调pH值至8.0，每升约需40-50ml浓盐酸，用水调整终体积至1L。如需其他PH的Tris，根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸。4.高温高压灭菌后，室温保存半年。注意：测PH时需使用温度补偿电极，因为温度变化对Tris的PH有很大影响。浓盐酸的体积（ml）8.6142128.53846566671.376pH9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.210％SDS组份浓度:10％（W/V）SDS配制量：500mL配置方法1.称量50g高纯度的SDS置于500mL蓝盖瓶中，加入约400mL的去离子水，68℃加热溶解。2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。3.将溶液定容至500mL后，室温保存。注意：SDS为固体粉末状，吸入会对肺造成损害，应在通风橱中称取SDS。溶解时，SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。30％APS（过硫酸铵）组份浓度：30％（W/V）APS配制量：1mL配制方法：1.准确称取0.3gAPS。2.加入0.8mL的去离子水溶解。3.贮存于4℃。注意：30％的过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。\n10×SDS-PAGERunningBuffer配制量：1L配制方法：1．称量下列试剂,置于1L蓝盖瓶中。Tris20g;Glycine144g;10%SDS100ml2．加入约700ml的去离子水搅拌溶解。3．定容至1L，混匀，室温保存。50XTAEBuffer（pH8.5）组分浓度：2MTris-base，100mMEDTA,1M冰乙酸配制量：1L配制方法：1、称取下列试剂，置于1L蓝盖瓶中：Tris-base242.2g;0.5MEDTA(PH8.0)200ml2．加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解，再加入57.1ml的冰乙酸，混合均匀。3、加去离子水将溶液定容至1L。4、高温高压灭菌后，室温保存半年。6XDNALoadingBuffer（Agarose）组分浓度：0.09％（W/V）溴酚蓝0.09％（W/V）xylenecyanolFF,60%glycerol,60mMEDTA配制量：50ml配制方法：1.称取下列试剂，置于50ml离心管中：溴酚兰0.125g2.向离心管中30ml去离子水，加热充分溶解。3.加入15ml甘油，最终用去离子水定容至50ml，混匀，室温保存。4.使用时，分装1ml一管，加入,4℃保存。5Xloadingbuffer(蛋白)1．称量下列试剂置于10ml塑料离心管中。1MTris•Cl(pH6.8)1.25ml10%SDS（电泳级）5ml溴酚蓝（BPB）25mg(可以少加一点)甘油2.5ml2-ME250ul2．加去离子水溶解后定容至5ml。3．小份（500ul/份）分装后于-20保存。5．加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右